华西药学杂志
華西藥學雜誌
화서약학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES
2008年
6期
639-642
,共4页
孔祥丽%冯云%李燕%李小玉%陈思秀%张平
孔祥麗%馮雲%李燕%李小玉%陳思秀%張平
공상려%풍운%리연%리소옥%진사수%장평
白细胞介素15/Fc融合蛋白%真核表达%白细胞介素15%CD8+T细胞
白細胞介素15/Fc融閤蛋白%真覈錶達%白細胞介素15%CD8+T細胞
백세포개소15/Fc융합단백%진핵표체%백세포개소15%CD8+T세포
目的 制备真核表达小鼠白细胞介素15(IL-15)和IgGγ1 Fc段融合蛋白,并探讨其对抗原特异性CD8+T细胞的作用.方法 运用RT-PCR方法,从B6小鼠脾细胞中分离小鼠IL-15和IgG γ1绞链区-CH2-CH3 Fc cDNA.在IL-15 3'端和Fc 5'端引入BamH I酶切位点,将IL-15和Fc直接连接,构建小鼠IL-15/Fe融合蛋白基因,再连接到真核表达质粒载体pcDNA3.1(a+)上,转化CHO-S细胞表达、纯化后,研究其活性.结果 融合蛋白486 bp的编码由162个氨基酸组成,其中含48个信号肽氨基酸的小鼠IL-15前体蛋白和由681 bp编码227个氨基酸的IgGγ1-CH2-CH3功能区构成;表达蛋白在IL-15信号肽引导下能高效分泌到培养液中,有二聚体和三聚体两种天然结构,单体分子量约50 kDa,能特异性的结合IL-15R并抑制抗原诱导的CD8+T细胞的增殖反应.结论 成功构建了小鼠IL-15/Fc融合蛋白真核表达载体,并在CHO-S细胞中得到高效表达.此融合蛋白具有较高的生物学活性,可有效地抑制抗原特异性CD8+细胞的增殖反应.
目的 製備真覈錶達小鼠白細胞介素15(IL-15)和IgGγ1 Fc段融閤蛋白,併探討其對抗原特異性CD8+T細胞的作用.方法 運用RT-PCR方法,從B6小鼠脾細胞中分離小鼠IL-15和IgG γ1絞鏈區-CH2-CH3 Fc cDNA.在IL-15 3'耑和Fc 5'耑引入BamH I酶切位點,將IL-15和Fc直接連接,構建小鼠IL-15/Fe融閤蛋白基因,再連接到真覈錶達質粒載體pcDNA3.1(a+)上,轉化CHO-S細胞錶達、純化後,研究其活性.結果 融閤蛋白486 bp的編碼由162箇氨基痠組成,其中含48箇信號肽氨基痠的小鼠IL-15前體蛋白和由681 bp編碼227箇氨基痠的IgGγ1-CH2-CH3功能區構成;錶達蛋白在IL-15信號肽引導下能高效分泌到培養液中,有二聚體和三聚體兩種天然結構,單體分子量約50 kDa,能特異性的結閤IL-15R併抑製抗原誘導的CD8+T細胞的增殖反應.結論 成功構建瞭小鼠IL-15/Fc融閤蛋白真覈錶達載體,併在CHO-S細胞中得到高效錶達.此融閤蛋白具有較高的生物學活性,可有效地抑製抗原特異性CD8+細胞的增殖反應.
목적 제비진핵표체소서백세포개소15(IL-15)화IgGγ1 Fc단융합단백,병탐토기대항원특이성CD8+T세포적작용.방법 운용RT-PCR방법,종B6소서비세포중분리소서IL-15화IgG γ1교련구-CH2-CH3 Fc cDNA.재IL-15 3'단화Fc 5'단인입BamH I매절위점,장IL-15화Fc직접련접,구건소서IL-15/Fe융합단백기인,재련접도진핵표체질립재체pcDNA3.1(a+)상,전화CHO-S세포표체、순화후,연구기활성.결과 융합단백486 bp적편마유162개안기산조성,기중함48개신호태안기산적소서IL-15전체단백화유681 bp편마227개안기산적IgGγ1-CH2-CH3공능구구성;표체단백재IL-15신호태인도하능고효분비도배양액중,유이취체화삼취체량충천연결구,단체분자량약50 kDa,능특이성적결합IL-15R병억제항원유도적CD8+T세포적증식반응.결론 성공구건료소서IL-15/Fc융합단백진핵표체재체,병재CHO-S세포중득도고효표체.차융합단백구유교고적생물학활성,가유효지억제항원특이성CD8+세포적증식반응.
