华中农业大学学报
華中農業大學學報
화중농업대학학보
JOURNAL OF HUAZHONG AGRICULTURAL UNIVERSITY
2008年
6期
705-708
,共4页
刘建忠%敖敬%田为宇%周卫%鲁礼林%张晓龙
劉建忠%敖敬%田為宇%週衛%魯禮林%張曉龍
류건충%오경%전위우%주위%로례림%장효룡
人肥胖基因%原核表达载体%诱导表达
人肥胖基因%原覈錶達載體%誘導錶達
인비반기인%원핵표체재체%유도표체
通过设计1对PCR引物(上游引物,5'-GCCATATGGTGCCGATCCAAAG-3',下游引物,5'-GA GAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3'),采用PCR方法扩增出人肥胖基因编码成熟肽的核苷酸序列,将扩增产物从琼脂糖凝胶上回收后插入测序载体pMD-18-T后进行了核苷酸序列测定.将经EcoRI和Nde I双酶切后的扩增产物插入经EcoR I和Nde I双酶切后的大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建了可在大肠杆菌中高效表达人瘦蛋白的表达载体.将表达载体转化人大肠杆菌菌株BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测,结果表明构建的人肥胖基因表达载体得到高效表达,重组蛋白占到菌体总蛋白的31.2%.
通過設計1對PCR引物(上遊引物,5'-GCCATATGGTGCCGATCCAAAG-3',下遊引物,5'-GA GAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3'),採用PCR方法擴增齣人肥胖基因編碼成熟肽的覈苷痠序列,將擴增產物從瓊脂糖凝膠上迴收後插入測序載體pMD-18-T後進行瞭覈苷痠序列測定.將經EcoRI和Nde I雙酶切後的擴增產物插入經EcoR I和Nde I雙酶切後的大腸桿菌錶達載體pET-28a(+),構建瞭可在大腸桿菌中高效錶達人瘦蛋白的錶達載體.將錶達載體轉化人大腸桿菌菌株BL21,經IPTG誘導後進行SDS-PAGE檢測,結果錶明構建的人肥胖基因錶達載體得到高效錶達,重組蛋白佔到菌體總蛋白的31.2%.
통과설계1대PCR인물(상유인물,5'-GCCATATGGTGCCGATCCAAAG-3',하유인물,5'-GA GAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3'),채용PCR방법확증출인비반기인편마성숙태적핵감산서렬,장확증산물종경지당응효상회수후삽입측서재체pMD-18-T후진행료핵감산서렬측정.장경EcoRI화Nde I쌍매절후적확증산물삽입경EcoR I화Nde I쌍매절후적대장간균표체재체pET-28a(+),구건료가재대장간균중고효표체인수단백적표체재체.장표체재체전화인대장간균균주BL21,경IPTG유도후진행SDS-PAGE검측,결과표명구건적인비반기인표체재체득도고효표체,중조단백점도균체총단백적31.2%.
