从大肠杆菌中表达、纯化宁乡猪N-乙酰谷氨酸合成酶并制备其多克隆抗体
종대장간균중표체、순화저향저N-을선곡안산합성매병제비기다극륭항체
Expression and Purification of N-acetylglutamate Synthase from Ningxiang Pig in Escherichia Coll and Preparation of Its Polyclonal Antibody
  • 万方数据
    激光生物学报 격광생물학보
    ACTA LASER BIOLOGY SINICA
    2008年 6期 750-755 ,共6页

    宋小燕%耿梅梅%褚武英%李铁军%张建社%石常友%王文策%印遇龙%伍国耀

    송소연%경매매%저무영%리철군%장건사%석상우%왕문책%인우룡%오국요

    宁乡猪%N-乙酰谷氨酸合成酶%多克隆抗体%免疫印迹%免疫组化 寧鄉豬%N-乙酰穀氨痠閤成酶%多剋隆抗體%免疫印跡%免疫組化
    저향저%N-을선곡안산합성매%다극륭항체%면역인적%면역조화
    N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶--氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ变象异构激活是必需的.N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶Ⅰ的活性来调节尿素合成.我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒.将重组质粒转化到Ecoli BL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白.通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa.一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体.通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性.据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS.
    N-을선곡안산합성매최화생성적N-을선곡안산(NAGS)대우포유동물뇨소순배제일개매--안기갑선린산합성매Ⅰ변상이구격활시필수적.N-을선곡안산합성매정위우간장화소장선립체기질중,통과제공N-을선곡안산조절안기갑선린산합성매Ⅰ적활성래조절뇨소합성.아문용RT-PCR방법종저향저간장중확증료N-을선곡안산합성매적개발열독광,병장차기인련접도원핵표체재체상,구건료pET-NAGS질립.장중조질립전화도Ecoli BL21(DE3),재IPTG유도하표체His-NAGS융합단백.통과SDS-PAGE,득출NAGS분자량약위40kDa.일보친화층석순화후,아문장순화후적NAGS단백주사도신서란대백토중제비다극륭항체.통과면역조화화면역인적측시항체,결과표명차항체유교호적항원성화특이성.거아문소지,저시제일차재대장간균중표체래원우저향저적NAGS.
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