天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2008年
11期
843-845
,共3页
史晓文%刘德敏%孙颖%张捷
史曉文%劉德敏%孫穎%張捷
사효문%류덕민%손영%장첩
胞间信号肽类和蛋白质类%基因表达%大肠杆菌%遗传载体%脂联素
胞間信號肽類和蛋白質類%基因錶達%大腸桿菌%遺傳載體%脂聯素
포간신호태류화단백질류%기인표체%대장간균%유전재체%지련소
目的:构建人脂联素重组表达载体PQE30/ADPN,并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白,对表达产物进行鉴定.方法:将构建好的人脂联素克隆载体PUC57/ADPN与原核表达载体PQE30通过双酶切方法位点特异地连接在一起,再转化人大肠杆菌JM109感受态细胞中.通过筛选得到含有人脂联素基因的重组载体PQE30/ADPN,并用IPTG在大肠杆菌M15中诱导表达.结果:PCR获得长度为753 bp目的片段,经PQE30原核表达载体连接、筛选及序列分析后,证实所插入的目的片段与GenBank检索的人脂联素cDNA序列(Accession NM-004797)100%匹配;含重组Adiponectin质粒的大肠杆菌经0.4mmol/L的IPTG诱导6h后有表达.结论:应用并成功构建了人脂联素原核表达载体PQE30/ADPN,且在大肠杆菌中获得有效表达.
目的:構建人脂聯素重組錶達載體PQE30/ADPN,併在大腸桿菌宿主繫統中錶達齣脂聯素蛋白,對錶達產物進行鑒定.方法:將構建好的人脂聯素剋隆載體PUC57/ADPN與原覈錶達載體PQE30通過雙酶切方法位點特異地連接在一起,再轉化人大腸桿菌JM109感受態細胞中.通過篩選得到含有人脂聯素基因的重組載體PQE30/ADPN,併用IPTG在大腸桿菌M15中誘導錶達.結果:PCR穫得長度為753 bp目的片段,經PQE30原覈錶達載體連接、篩選及序列分析後,證實所插入的目的片段與GenBank檢索的人脂聯素cDNA序列(Accession NM-004797)100%匹配;含重組Adiponectin質粒的大腸桿菌經0.4mmol/L的IPTG誘導6h後有錶達.結論:應用併成功構建瞭人脂聯素原覈錶達載體PQE30/ADPN,且在大腸桿菌中穫得有效錶達.
목적:구건인지련소중조표체재체PQE30/ADPN,병재대장간균숙주계통중표체출지련소단백,대표체산물진행감정.방법:장구건호적인지련소극륭재체PUC57/ADPN여원핵표체재체PQE30통과쌍매절방법위점특이지련접재일기,재전화인대장간균JM109감수태세포중.통과사선득도함유인지련소기인적중조재체PQE30/ADPN,병용IPTG재대장간균M15중유도표체.결과:PCR획득장도위753 bp목적편단,경PQE30원핵표체재체련접、사선급서렬분석후,증실소삽입적목적편단여GenBank검색적인지련소cDNA서렬(Accession NM-004797)100%필배;함중조Adiponectin질립적대장간균경0.4mmol/L적IPTG유도6h후유표체.결론:응용병성공구건료인지련소원핵표체재체PQE30/ADPN,차재대장간균중획득유효표체.
