CAJ | 학술논문

本研究扩增和克隆了堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子,并在大肠杆菌中表达出MIF重组蛋白.根据GenBank中的MIF mRNA序列,设计特异引物,采用PCR方法以堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板扩增获得MIF基因,将MIF基因片段连接到原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET28a-MIF,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对表达产物进行Western blot分析.结果从堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库中扩增出MIF基因片段,长度为709 bp;经序列分析,扩增片段的核苷酸序列与GenBank中登录的MIF序列的同源性为99.5%;经SDS-PAGE检测表明重组质粒pET(28a)-MIF在大肠杆菌中以包涵体形式表达:Western blot分析证明堆形艾美耳球虫抗血清可与重组表达蛋白特异性结合.本研究结果为进一步研究该基因的功能奠定了基础.
본연구확증화극륭료퇴형애미이구충거서세포이동억제인자,병재대장간균중표체출MIF중조단백.근거GenBank중적MIF mRNA서렬,설계특이인물,채용PCR방법이퇴형애미이구충포자화란낭cDNA문고위모판확증획득MIF기인,장MIF기인편단련접도원핵표체재체pET-28a(+),구건중조표체질립pET28a-MIF,병재대장간균BL21(DE3)중유도표체,대표체산물진행Western blot분석.결과종퇴형애미이구충포자화란낭cDNA문고중확증출MIF기인편단,장도위709 bp;경서렬분석,확증편단적핵감산서렬여GenBank중등록적MIF서렬적동원성위99.5%;경SDS-PAGE검측표명중조질립pET(28a)-MIF재대장간균중이포함체형식표체:Western blot분석증명퇴형애미이구충항혈청가여중조표체단백특이성결합.본연구결과위진일보연구해기인적공능전정료기출.