广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2008年
4期
542-544
,共3页
汤明芳%陆晓和%马骊%温茜%罗微%周瑾%袁伟%宫玉波
湯明芳%陸曉和%馬驪%溫茜%囉微%週瑾%袁偉%宮玉波
탕명방%륙효화%마려%온천%라미%주근%원위%궁옥파
角膜%基因转染%绿色荧光蛋白%腺相关病毒%基质瓣
角膜%基因轉染%綠色熒光蛋白%腺相關病毒%基質瓣
각막%기인전염%록색형광단백%선상관병독%기질판
目的 研究重组腺相关病毒(rAAV)介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因经角膜基质瓣转染兔角膜基质细胞的有效性和安全性.方法 微型角膜刀制作兔角膜基质瓣;转染组用含rAAV-EGFP转染液浸泡角膜瓣和角膜基质床10 min,对照组用等量BSS液浸泡角膜辩和角膜基质床10min,不同时间点(1,3,7,14,21 d)通过荧光体视镜观察角膜出现EGFP荧光的起始时间及分布情况,收集角膜,其中一半用激光共聚焦显微镜观察、照相,另一半固定后行HE染色.结果 转染组于转粢第3天,体视荧光显微镜下观察到兔眼角膜辩内面及基质床中开始有GFP阳性表达;7 d达到高峰,21 d时仍有微弱表达.第7天在激光共聚焦显微镜下可观察到兔角膜基质中有明显的荧光表达,对照组角膜始终未见荧光表达,转染组和对照组角膜HE染色均未见炎症细胞浸润及新生血管等异常.结论 rAAV-EGFP经兔角膜基质辩转染角膜基质细胞的方法可将基因安全、相对高效地转入角膜基质细胞.为转基因治疗角膜病提供了新的转粢途径.
目的 研究重組腺相關病毒(rAAV)介導增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因經角膜基質瓣轉染兔角膜基質細胞的有效性和安全性.方法 微型角膜刀製作兔角膜基質瓣;轉染組用含rAAV-EGFP轉染液浸泡角膜瓣和角膜基質床10 min,對照組用等量BSS液浸泡角膜辯和角膜基質床10min,不同時間點(1,3,7,14,21 d)通過熒光體視鏡觀察角膜齣現EGFP熒光的起始時間及分佈情況,收集角膜,其中一半用激光共聚焦顯微鏡觀察、照相,另一半固定後行HE染色.結果 轉染組于轉粢第3天,體視熒光顯微鏡下觀察到兔眼角膜辯內麵及基質床中開始有GFP暘性錶達;7 d達到高峰,21 d時仍有微弱錶達.第7天在激光共聚焦顯微鏡下可觀察到兔角膜基質中有明顯的熒光錶達,對照組角膜始終未見熒光錶達,轉染組和對照組角膜HE染色均未見炎癥細胞浸潤及新生血管等異常.結論 rAAV-EGFP經兔角膜基質辯轉染角膜基質細胞的方法可將基因安全、相對高效地轉入角膜基質細胞.為轉基因治療角膜病提供瞭新的轉粢途徑.
목적 연구중조선상관병독(rAAV)개도증강형록색형광단백(EGFP)기인경각막기질판전염토각막기질세포적유효성화안전성.방법 미형각막도제작토각막기질판;전염조용함rAAV-EGFP전염액침포각막판화각막기질상10 min,대조조용등량BSS액침포각막변화각막기질상10min,불동시간점(1,3,7,14,21 d)통과형광체시경관찰각막출현EGFP형광적기시시간급분포정황,수집각막,기중일반용격광공취초현미경관찰、조상,령일반고정후행HE염색.결과 전염조우전자제3천,체시형광현미경하관찰도토안각막변내면급기질상중개시유GFP양성표체;7 d체도고봉,21 d시잉유미약표체.제7천재격광공취초현미경하가관찰도토각막기질중유명현적형광표체,대조조각막시종미견형광표체,전염조화대조조각막HE염색균미견염증세포침윤급신생혈관등이상.결론 rAAV-EGFP경토각막기질변전염각막기질세포적방법가장기인안전、상대고효지전입각막기질세포.위전기인치료각막병제공료신적전자도경.
