靶向HIV-1 vif的高效siRNA的筛选及慢病毒介导的体外抗病毒研究
파향HIV-1 vif적고효siRNA적사선급만병독개도적체외항병독연구
Screening of Highly Effective siRNA Sequence Targeting to HIV-1 vif and the Lentiviral-mediated Antiviral Research in vitro
  • 万方数据
    病毒学报 병독학보
    CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
    2008年 2期 88-95 ,共8页

    张涛%程通%张雅丽%魏丽华%蔡毅君%张军%朱桦%韩家淮%夏宁邵

    장도%정통%장아려%위려화%채의군%장군%주화%한가회%하저소

    RNA干扰%HIV-1%vif%重组慢病毒 RNA榦擾%HIV-1%vif%重組慢病毒
    RNA간우%HIV-1%vif%중조만병독
    RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础.本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体构建了相应的shRNA表达质粒.通过与pNL4-3质粒在293FT细胞中进行共转染抑制实验,以及对初筛获得的高效序列进行保守性分析显示siRNA-vif37序列具有高效抑制效率和较好的保守性特征.通过与pGL3-vif报告质粒的共转染实验证明siRNA-vif37具有vif基因抑制特异性.带有shRNA-vif37表达元件的重组慢病毒转导后的MT-4细胞在HIV-1NL4-3体外攻毒实验中可显示出较有效的抑制病毒复制的能力,本研究进一步对转导后细胞进行克隆化筛选,获得稳定整合shRNA-vif37表达元件的MT-4-vif37细胞克隆,该细胞具有显著的抑制病毒复制的能力,在高攻毒剂量下仍可获得良好的抑制效果.本研究为进一步应用RNAi技术进行新型艾滋病治疗方法研究提供了重要基础.
    RNAi기술재애자병치료연구중이전현출거대적잠력,겸구고효억제특성화보수성적siRNA파위시기획득성공응용적중요기출.본연구선택이HIV-1 vif기인위파구사선고효보수적RNAi서렬,공선택설계료30개식별불동위점적siRNA서렬,이pSUPER위재체구건료상응적shRNA표체질립.통과여pNL4-3질립재293FT세포중진행공전염억제실험,이급대초사획득적고효서렬진행보수성분석현시siRNA-vif37서렬구유고효억제효솔화교호적보수성특정.통과여pGL3-vif보고질립적공전염실험증명siRNA-vif37구유vif기인억제특이성.대유shRNA-vif37표체원건적중조만병독전도후적MT-4세포재HIV-1NL4-3체외공독실험중가현시출교유효적억제병독복제적능력,본연구진일보대전도후세포진행극륭화사선,획득은정정합shRNA-vif37표체원건적MT-4-vif37세포극륭,해세포구유현저적억제병독복제적능력,재고공독제량하잉가획득량호적억제효과.본연구위진일보응용RNAi기술진행신형애자병치료방법연구제공료중요기출.
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