CAJ | 학술논문

基于SYBR Green I荧光染料与双链DNA(dsDNA)结合产生荧光的原理,建立一种高精度、高通量的双链DNA 定量方法.将梯度稀释后的基因组DNA及已知浓度的λDNA与等体积的SYBR Green I(4×)充分混合后,利用荧光定量PCR仪采集荧光信号,以ROX(1×)作为校正染料进行定量分析;同时利用紫外分光光度计对样品进行平行测定,比较该方法与紫外分光光度法的检测限与准确度.紫外分光光度法的检测限为2 ng/μl,而SYBR Green I荧光定量法的检测限可达到0.015 ng/μl,并且在0.015～2 ng/μl范围内,SYBR Green I荧光强度与λDNA浓度呈线性关系(R2=0.9999),比紫外分光光度法灵敏100倍以上,并可准确定量低纯度的DNA样品.此方法具有重复性好、高通量的特点,仅需少量的生物样本即可满足定量要求,为分子生物学研究及临床检验等多个领域提供了一种可靠的dsDNA定量方法.
기우SYBR Green I형광염료여쌍련DNA(dsDNA)결합산생형광적원리,건립일충고정도、고통량적쌍련DNA 정량방법.장제도희석후적기인조DNA급이지농도적λDNA여등체적적SYBR Green I(4×)충분혼합후,이용형광정량PCR의채집형광신호,이ROX(1×)작위교정염료진행정량분석;동시이용자외분광광도계대양품진행평행측정,비교해방법여자외분광광도법적검측한여준학도.자외분광광도법적검측한위2 ng/μl,이SYBR Green I형광정량법적검측한가체도0.015 ng/μl,병차재0.015～2 ng/μl범위내,SYBR Green I형광강도여λDNA농도정선성관계(R2=0.9999),비자외분광광도법령민100배이상,병가준학정량저순도적DNA양품.차방법구유중복성호、고통량적특점,부수소량적생물양본즉가만족정량요구,위분자생물학연구급림상검험등다개영역제공료일충가고적dsDNA정량방법.