中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2007年
10期
829-833
,共5页
禽腺联病毒序列%人溶菌酶基因%鸡%输卵管
禽腺聯病毒序列%人溶菌酶基因%鷄%輸卵管
금선련병독서렬%인용균매기인%계%수란관
将鸡卵清蛋白基因5'-调控区控制的人溶菌酶(hLYZ)cDNA表达盒插入禽AAV末端反向重复序列之间,将CMV启动子控制的rep表达盒插入其下游,获得的表达载体pRep2ITR-OV4-LYZ用聚乙烯亚胺包裹,经翅静脉注射产蛋鸡,待蛋清中rhLYZ表达水平下降至注射前水平时,用pRep2ITR-OV4-LYZ进行3次重复注射,以RBB-R染料标记比色法和Western-blotting检测蛋清中rhLYZ表达,以细菌生长抑制试验检测rhLYZ活性.结果,在相同试验条件下,pRep2ITR-OV4-LYZ表达rhLYZ的水平和时间优于不含禽AAV序列的pOV4-LYZ,rhLYZ表达水平和时间随载体注射次数增加呈上升和延长趋势,rhLYZ的分子质量与天然hLYZ相同,对致乳牛乳腺炎大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌具有显著的抑制作用.试验结果提示,禽AAV ITR和rep序列能促进hLYZ基因在鸡输卵管细胞中正确表达.
將鷄卵清蛋白基因5'-調控區控製的人溶菌酶(hLYZ)cDNA錶達盒插入禽AAV末耑反嚮重複序列之間,將CMV啟動子控製的rep錶達盒插入其下遊,穫得的錶達載體pRep2ITR-OV4-LYZ用聚乙烯亞胺包裹,經翅靜脈註射產蛋鷄,待蛋清中rhLYZ錶達水平下降至註射前水平時,用pRep2ITR-OV4-LYZ進行3次重複註射,以RBB-R染料標記比色法和Western-blotting檢測蛋清中rhLYZ錶達,以細菌生長抑製試驗檢測rhLYZ活性.結果,在相同試驗條件下,pRep2ITR-OV4-LYZ錶達rhLYZ的水平和時間優于不含禽AAV序列的pOV4-LYZ,rhLYZ錶達水平和時間隨載體註射次數增加呈上升和延長趨勢,rhLYZ的分子質量與天然hLYZ相同,對緻乳牛乳腺炎大腸桿菌、葡萄毬菌和鏈毬菌具有顯著的抑製作用.試驗結果提示,禽AAV ITR和rep序列能促進hLYZ基因在鷄輸卵管細胞中正確錶達.
장계란청단백기인5'-조공구공제적인용균매(hLYZ)cDNA표체합삽입금AAV말단반향중복서렬지간,장CMV계동자공제적rep표체합삽입기하유,획득적표체재체pRep2ITR-OV4-LYZ용취을희아알포과,경시정맥주사산단계,대단청중rhLYZ표체수평하강지주사전수평시,용pRep2ITR-OV4-LYZ진행3차중복주사,이RBB-R염료표기비색법화Western-blotting검측단청중rhLYZ표체,이세균생장억제시험검측rhLYZ활성.결과,재상동시험조건하,pRep2ITR-OV4-LYZ표체rhLYZ적수평화시간우우불함금AAV서렬적pOV4-LYZ,rhLYZ표체수평화시간수재체주사차수증가정상승화연장추세,rhLYZ적분자질량여천연hLYZ상동,대치유우유선염대장간균、포도구균화련구균구유현저적억제작용.시험결과제시,금AAV ITR화rep서렬능촉진hLYZ기인재계수란관세포중정학표체.