CAJ | 학술논문

为了研究低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)在干细胞增殖分化过程中的作用机制,构建了2个HIF-1α慢病毒siRNA干涉载体,并转染人胎儿肝脏基质细胞(fetal liver stromal cell,FLSC).根据绿色荧光蛋白的表达评估转染效率后进行流式细胞分选,获得高表达慢病毒干涉载体的细胞.实时荧光定量PCR和蛋白质印迹检测了转染细胞中HIF-1α基因的干涉效率,结果显示,与对照组相比,常氧下培养的细胞HIF-1α基因表达量仅为其相对表达量的18.8%和25.5%,干涉效率分别为81.2%和74.5%,低氧处理后的细胞HIF-1α相对表达量分别为对照组的21.2%和29.3%,干涉效率分别为78.8%和70.7%,均具有显著差异.蛋白质印迹结果显示,在蛋白质水平表达也明显受抑制,且重组干涉质粒pSicoR-HIF-1α1的干涉效应较强.RT-PCR、免疫荧光和EUSA法检测了沉默HIE-1α后胎肝基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)在RNA和蛋白质水平的表达变化,干涉后细胞SDF-1α的表达明显减低.低氧条件下SDF-1α基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在干细胞增殖分化的分子调控机制中具重要作用.
위료연구저양유도인자(hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)재간세포증식분화과정중적작용궤제,구건료2개HIF-1α만병독siRNA간섭재체,병전염인태인간장기질세포(fetal liver stromal cell,FLSC).근거록색형광단백적표체평고전염효솔후진행류식세포분선,획득고표체만병독간섭재체적세포.실시형광정량PCR화단백질인적검측료전염세포중HIF-1α기인적간섭효솔,결과현시,여대조조상비,상양하배양적세포HIF-1α기인표체량부위기상대표체량적18.8%화25.5%,간섭효솔분별위81.2%화74.5%,저양처리후적세포HIF-1α상대표체량분별위대조조적21.2%화29.3%,간섭효솔분별위78.8%화70.7%,균구유현저차이.단백질인적결과현시,재단백질수평표체야명현수억제,차중조간섭질립pSicoR-HIF-1α1적간섭효응교강.RT-PCR、면역형광화EUSA법검측료침묵HIE-1α후태간기질세포연생인자1α(SDF-1α)재RNA화단백질수평적표체변화,간섭후세포SDF-1α적표체명현감저.저양조건하SDF-1α기인적조공작용유가능시통과저양격활HIF-1α이유도산생적,HIF-1α재간세포증식분화적분자조공궤제중구중요작용.