生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2007年
10期
1049-1054
,共6页
张玲%周俊立%李静铭%廖芳
張玲%週俊立%李靜銘%廖芳
장령%주준립%리정명%료방
LasR基因%反义核酸%细菌转化%毒力因子
LasR基因%反義覈痠%細菌轉化%毒力因子
LasR기인%반의핵산%세균전화%독력인자
PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.PCR扩增出约720 bp片段,与GenBank(No:NC 002516)报道的基因片段大小一致,构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense,并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较,转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明,LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.
PCR擴增LasR基因,用反嚮剋隆法構建LasR基因反義覈痠原覈錶達載體pUCP18/lasRantisense併轉化銅綠假單胞菌,經酶切、PCR及測序鑒定重組載體.RT-PCR檢測LasB基因和LasI基因mRNA的錶達,NAD法測定外毒素A的活性,紫外分光光度計測定綠膿菌素的產生水平.用轉化pUCP18/lasRantisense質粒菌株感染大鼠呼吸道併進行病理組織切片檢查.PCR擴增齣約720 bp片段,與GenBank(No:NC 002516)報道的基因片段大小一緻,構建瞭LasR基因反義覈痠原覈錶達載體pUCP18/lasRantisense,併成功轉化銅綠假單胞菌,且有效錶達,使轉化菌的毒力因子彈性蛋白酶、外毒素A和綠膿菌素錶達水平均降低.與標準株感染的大鼠比較,轉化pUCP18/lasRantisense質粒菌株感染的大鼠支氣管炎癥明顯減輕.上述結果錶明,LasR基因反義覈痠原覈錶達載體pUCP18/lasRantisense可以降低銅綠假單胞菌的毒力.
PCR확증LasR기인,용반향극륭법구건LasR기인반의핵산원핵표체재체pUCP18/lasRantisense병전화동록가단포균,경매절、PCR급측서감정중조재체.RT-PCR검측LasB기인화LasI기인mRNA적표체,NAD법측정외독소A적활성,자외분광광도계측정록농균소적산생수평.용전화pUCP18/lasRantisense질립균주감염대서호흡도병진행병리조직절편검사.PCR확증출약720 bp편단,여GenBank(No:NC 002516)보도적기인편단대소일치,구건료LasR기인반의핵산원핵표체재체pUCP18/lasRantisense,병성공전화동록가단포균,차유효표체,사전화균적독력인자탄성단백매、외독소A화록농균소표체수평균강저.여표준주감염적대서비교,전화pUCP18/lasRantisense질립균주감염적대서지기관염증명현감경.상술결과표명,LasR기인반의핵산원핵표체재체pUCP18/lasRantisense가이강저동록가단포균적독력.
