生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2007年
5期
858-861
,共4页
阮超然%黄晶星%魏梅红%李敏
阮超然%黃晶星%魏梅紅%李敏
원초연%황정성%위매홍%리민
RGD%蛛丝蛋白%高密度发酵%纯化
RGD%蛛絲蛋白%高密度髮酵%純化
RGD%주사단백%고밀도발효%순화
蜘蛛丝是自然界综合性能优良的天然蛋白质纤维之一,因其具有良好的生物相容性和可降解性在生物医学领域具有潜在的应用前景.在本室已经构建的RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因16多聚体基础上,通过首尾相连、倍加等方法进一步多聚化,得到RGD-蜘蛛拖丝蛋白基因32和64多聚体,分别将这两种多聚体与原核高效表达载体pET-30a(+)连接,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,得到的32多聚体表达重组子命名为pNSR32,64多聚体表达重组子命名为pNSR64.通过酶切、琼脂糖电泳鉴定及对目的片段的测序均与理论值相符.将32和64多聚体基因序列注册GenBank,序列号分别为DQ469929和DQ837297.重组体pNSR32和pNSR64经IPTG诱导表达,SDS-PAGE图谱显示表达产物分子量分别为102kD和196.6kD,与天然蛛丝蛋白分子量接近并与理论值相吻合.高分子量的蛛丝蛋白在原核生物成功实现高效表达,在国内外尚未见报道.在此基础上对pNSR32工程菌进行高密度发酵,建立了简单高效的目的蛋白纯化工艺.
蜘蛛絲是自然界綜閤性能優良的天然蛋白質纖維之一,因其具有良好的生物相容性和可降解性在生物醫學領域具有潛在的應用前景.在本室已經構建的RGD-蜘蛛拖絲蛋白基因16多聚體基礎上,通過首尾相連、倍加等方法進一步多聚化,得到RGD-蜘蛛拖絲蛋白基因32和64多聚體,分彆將這兩種多聚體與原覈高效錶達載體pET-30a(+)連接,轉化大腸桿菌BL21(DE3)pLysS,得到的32多聚體錶達重組子命名為pNSR32,64多聚體錶達重組子命名為pNSR64.通過酶切、瓊脂糖電泳鑒定及對目的片段的測序均與理論值相符.將32和64多聚體基因序列註冊GenBank,序列號分彆為DQ469929和DQ837297.重組體pNSR32和pNSR64經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE圖譜顯示錶達產物分子量分彆為102kD和196.6kD,與天然蛛絲蛋白分子量接近併與理論值相吻閤.高分子量的蛛絲蛋白在原覈生物成功實現高效錶達,在國內外尚未見報道.在此基礎上對pNSR32工程菌進行高密度髮酵,建立瞭簡單高效的目的蛋白純化工藝.
지주사시자연계종합성능우량적천연단백질섬유지일,인기구유량호적생물상용성화가강해성재생물의학영역구유잠재적응용전경.재본실이경구건적RGD-지주타사단백기인16다취체기출상,통과수미상련、배가등방법진일보다취화,득도RGD-지주타사단백기인32화64다취체,분별장저량충다취체여원핵고효표체재체pET-30a(+)련접,전화대장간균BL21(DE3)pLysS,득도적32다취체표체중조자명명위pNSR32,64다취체표체중조자명명위pNSR64.통과매절、경지당전영감정급대목적편단적측서균여이론치상부.장32화64다취체기인서렬주책GenBank,서렬호분별위DQ469929화DQ837297.중조체pNSR32화pNSR64경IPTG유도표체,SDS-PAGE도보현시표체산물분자량분별위102kD화196.6kD,여천연주사단백분자량접근병여이론치상문합.고분자량적주사단백재원핵생물성공실현고효표체,재국내외상미견보도.재차기출상대pNSR32공정균진행고밀도발효,건립료간단고효적목적단백순화공예.
