海南医学院学报
海南醫學院學報
해남의학원학보
2007年
5期
405-408
,共4页
谭光宏%宿静梅%黄风迎%王华%黄用豪%林映莹
譚光宏%宿靜梅%黃風迎%王華%黃用豪%林映瑩
담광굉%숙정매%황풍영%왕화%황용호%림영형
血管细胞粘附分子-1%真核表达%质粒%基因工程
血管細胞粘附分子-1%真覈錶達%質粒%基因工程
혈관세포점부분자-1%진핵표체%질립%기인공정
目的:构建小鼠血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真核表达质粒,了解该质粒是否能在真核细胞中有效表达.方法:以小鼠胚肝组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,应用基因工程技术将扩增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染CHO细胞,用Western Blot鉴定该质粒是否能够在真核细胞中表达相应的目的蛋白质.结果:成功扩增了小鼠VCAM-1全长基因cDNA,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA-mVCAM,Western Blot方法证实该质粒能在CHO真核细胞中正确表达目的蛋白.结论:成功构建了小鼠VCAM-1基因的真核表达质粒载体,为进一步研究VCAM-1的新功能和免疫治疗奠定了基础.
目的:構建小鼠血管細胞粘附分子-1(VCAM-1)基因真覈錶達質粒,瞭解該質粒是否能在真覈細胞中有效錶達.方法:以小鼠胚肝組織總RNA為模闆,通過RT-PCR擴增小鼠VCAM-1全段基因cDNA,應用基因工程技術將擴增的cDNA片段插入pcDNA3.1(+)真覈錶達質粒,構建重組真覈錶達質粒pcDNA-mVCAM,經限製性內切酶酶切分析及測序鑒定正確後,用脂質體轉染技術轉染CHO細胞,用Western Blot鑒定該質粒是否能夠在真覈細胞中錶達相應的目的蛋白質.結果:成功擴增瞭小鼠VCAM-1全長基因cDNA,酶切和測序證明正確構建瞭重組真覈錶達質粒pcDNA-mVCAM,Western Blot方法證實該質粒能在CHO真覈細胞中正確錶達目的蛋白.結論:成功構建瞭小鼠VCAM-1基因的真覈錶達質粒載體,為進一步研究VCAM-1的新功能和免疫治療奠定瞭基礎.
목적:구건소서혈관세포점부분자-1(VCAM-1)기인진핵표체질립,료해해질립시부능재진핵세포중유효표체.방법:이소서배간조직총RNA위모판,통과RT-PCR확증소서VCAM-1전단기인cDNA,응용기인공정기술장확증적cDNA편단삽입pcDNA3.1(+)진핵표체질립,구건중조진핵표체질립pcDNA-mVCAM,경한제성내절매매절분석급측서감정정학후,용지질체전염기술전염CHO세포,용Western Blot감정해질립시부능구재진핵세포중표체상응적목적단백질.결과:성공확증료소서VCAM-1전장기인cDNA,매절화측서증명정학구건료중조진핵표체질립pcDNA-mVCAM,Western Blot방법증실해질립능재CHO진핵세포중정학표체목적단백.결론:성공구건료소서VCAM-1기인적진핵표체질립재체,위진일보연구VCAM-1적신공능화면역치료전정료기출.
