黑龙江八一农垦大学学报
黑龍江八一農墾大學學報
흑룡강팔일농은대학학보
JOURNAL OF HEILONGJIANG AUGUST FIRST LAND RECLAMATION UNIVERSITY
2007年
5期
51-57
,共7页
丛华%杨谦%宋金柱%葛唯
叢華%楊謙%宋金柱%葛唯
총화%양겸%송금주%갈유
β-l,6-葡聚糖酶%细胞壁水解酶%同源建模%三级结构%木霉菌T88
β-l,6-葡聚糖酶%細胞壁水解酶%同源建模%三級結構%木黴菌T88
β-l,6-포취당매%세포벽수해매%동원건모%삼급결구%목매균T88
利用RT-PCR方法克隆得到β-l,6-葡聚糖酶BGN16.2的cDNA序列,并采用半定量RT-PCR法,研究以茯苓粉及病原菌细胞壁为诱导物对该基因诱导表达的影响.构建该酶基因到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上,转化酿酒酵母,用CMC糖化力法对目的基因表达产物的酶活性进行检测.克隆得到BGN16.2的cDNA基因开放阅读框长度为1 290 bp,编码429个氨基酸,推测蛋白分子量为48 kDa,预测的等电点pI为5.25.该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的β-l,6-葡聚糖酶并分泌到胞外.发酵液中的酶活在培养60 h时达到最高(2.1 U·mL-1),最适酶解温度为50 ℃,最适pH值为5.5.对该酶的一二级结构进行生物信息学分析的基础上,利用同源建模的方法完成了该酶的活性区域三级结构的建模.
利用RT-PCR方法剋隆得到β-l,6-葡聚糖酶BGN16.2的cDNA序列,併採用半定量RT-PCR法,研究以茯苓粉及病原菌細胞壁為誘導物對該基因誘導錶達的影響.構建該酶基因到釀酒酵母誘導型錶達載體pYES2上,轉化釀酒酵母,用CMC糖化力法對目的基因錶達產物的酶活性進行檢測.剋隆得到BGN16.2的cDNA基因開放閱讀框長度為1 290 bp,編碼429箇氨基痠,推測蛋白分子量為48 kDa,預測的等電點pI為5.25.該基因能在釀酒酵母中錶達有生物活性的β-l,6-葡聚糖酶併分泌到胞外.髮酵液中的酶活在培養60 h時達到最高(2.1 U·mL-1),最適酶解溫度為50 ℃,最適pH值為5.5.對該酶的一二級結構進行生物信息學分析的基礎上,利用同源建模的方法完成瞭該酶的活性區域三級結構的建模.
이용RT-PCR방법극륭득도β-l,6-포취당매BGN16.2적cDNA서렬,병채용반정량RT-PCR법,연구이복령분급병원균세포벽위유도물대해기인유도표체적영향.구건해매기인도양주효모유도형표체재체pYES2상,전화양주효모,용CMC당화역법대목적기인표체산물적매활성진행검측.극륭득도BGN16.2적cDNA기인개방열독광장도위1 290 bp,편마429개안기산,추측단백분자량위48 kDa,예측적등전점pI위5.25.해기인능재양주효모중표체유생물활성적β-l,6-포취당매병분비도포외.발효액중적매활재배양60 h시체도최고(2.1 U·mL-1),최괄매해온도위50 ℃,최괄pH치위5.5.대해매적일이급결구진행생물신식학분석적기출상,이용동원건모적방법완성료해매적활성구역삼급결구적건모.
