海洋水产研究
海洋水產研究
해양수산연구
MARINE FISHERIES RESEARCH
2007年
4期
72-76
,共5页
付峰%刘荭%范万红%江育林%黄倢
付峰%劉葒%範萬紅%江育林%黃倢
부봉%류홍%범만홍%강육림%황첩
鲤春病毒血症病毒%糖蛋白%克隆%毕赤酵母%分泌表达
鯉春病毒血癥病毒%糖蛋白%剋隆%畢赤酵母%分泌錶達
리춘병독혈증병독%당단백%극륭%필적효모%분비표체
根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5'引物和3'引物中分别引入酶切位点.以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体.获得的重组质粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521经线性化后,电击法转化毕赤酵母SMD1168菌株,构建分泌型表达SVCV糖蛋白的重组酵母菌株.酵母菌落PCR法检测表明,已成功构建分泌表达SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达.
根據SVCV糖蛋白基因序列設計引物,在5'引物和3'引物中分彆引入酶切位點.以病毒覈痠為模闆用RT-PCR方法擴增該段糖蛋白基因,將所得的基因片段(517和521)剋隆至穿梭載體pGAPZαA/B之GAP啟動子下遊位點,構建含α信號肽的重組錶達載體.穫得的重組質粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521經線性化後,電擊法轉化畢赤酵母SMD1168菌株,構建分泌型錶達SVCV糖蛋白的重組酵母菌株.酵母菌落PCR法檢測錶明,已成功構建分泌錶達SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑點印跡法進一步分析錶明有目的蛋白的成功錶達.
근거SVCV당단백기인서렬설계인물,재5'인물화3'인물중분별인입매절위점.이병독핵산위모판용RT-PCR방법확증해단당단백기인,장소득적기인편단(517화521)극륭지천사재체pGAPZαA/B지GAP계동자하유위점,구건함α신호태적중조표체재체.획득적중조질립pGAPZαA-517화pGAPZαB-521경선성화후,전격법전화필적효모SMD1168균주,구건분비형표체SVCV당단백적중조효모균주.효모균락PCR법검측표명,이성공구건분비표체SVCV당단백적효모기인공정균주,반점인적법진일보분석표명유목적단백적성공표체.
