中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
33期
6606-6610
,共5页
王海莲%鞠秀丽%李栋%侯怀水%时庆%沈柏均
王海蓮%鞠秀麗%李棟%侯懷水%時慶%瀋柏均
왕해련%국수려%리동%후부수%시경%침백균
骨髓%间充质干细胞%诱导分化%胰岛素分泌细胞
骨髓%間充質榦細胞%誘導分化%胰島素分泌細胞
골수%간충질간세포%유도분화%이도소분비세포
目的:探讨体外诱导骨髓间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化的可能性,并观察其动态变化.方法:实验于2005-09/2007-03在山东大学齐鲁医院完成.①标本来源:骨髓标本15例来自山东大学齐鲁医院成人骨髓检查结果正常者,均签署捐献同意书.②实验方法:无菌条件下取骨髓2.0～5.0 mL,采用percoll分离液和贴壁法获得纯化的成人骨髓间充质干细胞.③实验评估:流式细胞仪行细胞表面抗原检测,在适当的条件下诱导其分化为成骨细胞和脂肪细胞.采用两步法向胰岛素分泌细胞诱导,观察其在碱性成纤维细胞生长因子、活化素A、胰岛素样生长因子、尼克酰胺等因子刺激下向胰岛素分泌细胞分化的动态变化.双硫踪染色鉴定胰岛样细胞团,酶联免疫吸附试验检测细胞分泌胰岛素的情况,RT-PCR检测胰岛细胞特异基因的表达.结果:①骨髓间充质干细胞的生长特性及免疫表型:分离培养获得的贴壁细胞,呈形态均一的梭形,流式细胞仪检测CD34、CD45表达阴性,CD29、CD44表达阳性.②向成骨细胞和脂肪细胞的诱导分化:此类细胞经茜素红染色、油红O染色均呈阳性,可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞.③向胰岛素分泌细胞的诱导分化:第1步诱导后出现细胞簇,双硫腙染色不着色,胰岛素分泌量少,仅检测到PDX-1基因的表达,证实其为胰岛前体细胞.第2步诱导后细胞簇数目逐渐上升,至诱导14 d大部分细胞簇经双硫腙染色都呈红色.④诱导后培养上清中胰岛素含量:诱导第3,7,14,21天的胰岛素分泌量分别为(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L.⑤胰岛细胞特异基因的表达:诱导7 d仅检测到PDX-1基因的表达,insulin 1、insulin 2和Glut 2基因均不表达.诱导14,21 d检测到insulin 2、PDX-1基因表达,insulin 1基因弱表达,Glut 2基因不表达.结论:体外分离、纯化得到的骨髓间充质干细胞诱导7 d可分化出胰岛前体细胞,不具功能性;诱导14 d后可成功地分化出成熟的具有功能性的胰岛素分泌细胞.
目的:探討體外誘導骨髓間充質榦細胞嚮胰島素分泌細胞分化的可能性,併觀察其動態變化.方法:實驗于2005-09/2007-03在山東大學齊魯醫院完成.①標本來源:骨髓標本15例來自山東大學齊魯醫院成人骨髓檢查結果正常者,均籤署捐獻同意書.②實驗方法:無菌條件下取骨髓2.0～5.0 mL,採用percoll分離液和貼壁法穫得純化的成人骨髓間充質榦細胞.③實驗評估:流式細胞儀行細胞錶麵抗原檢測,在適噹的條件下誘導其分化為成骨細胞和脂肪細胞.採用兩步法嚮胰島素分泌細胞誘導,觀察其在堿性成纖維細胞生長因子、活化素A、胰島素樣生長因子、尼剋酰胺等因子刺激下嚮胰島素分泌細胞分化的動態變化.雙硫蹤染色鑒定胰島樣細胞糰,酶聯免疫吸附試驗檢測細胞分泌胰島素的情況,RT-PCR檢測胰島細胞特異基因的錶達.結果:①骨髓間充質榦細胞的生長特性及免疫錶型:分離培養穫得的貼壁細胞,呈形態均一的梭形,流式細胞儀檢測CD34、CD45錶達陰性,CD29、CD44錶達暘性.②嚮成骨細胞和脂肪細胞的誘導分化:此類細胞經茜素紅染色、油紅O染色均呈暘性,可誘導分化為成骨細胞和脂肪細胞.③嚮胰島素分泌細胞的誘導分化:第1步誘導後齣現細胞簇,雙硫腙染色不著色,胰島素分泌量少,僅檢測到PDX-1基因的錶達,證實其為胰島前體細胞.第2步誘導後細胞簇數目逐漸上升,至誘導14 d大部分細胞簇經雙硫腙染色都呈紅色.④誘導後培養上清中胰島素含量:誘導第3,7,14,21天的胰島素分泌量分彆為(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L.⑤胰島細胞特異基因的錶達:誘導7 d僅檢測到PDX-1基因的錶達,insulin 1、insulin 2和Glut 2基因均不錶達.誘導14,21 d檢測到insulin 2、PDX-1基因錶達,insulin 1基因弱錶達,Glut 2基因不錶達.結論:體外分離、純化得到的骨髓間充質榦細胞誘導7 d可分化齣胰島前體細胞,不具功能性;誘導14 d後可成功地分化齣成熟的具有功能性的胰島素分泌細胞.
목적:탐토체외유도골수간충질간세포향이도소분비세포분화적가능성,병관찰기동태변화.방법:실험우2005-09/2007-03재산동대학제로의원완성.①표본래원:골수표본15례래자산동대학제로의원성인골수검사결과정상자,균첨서연헌동의서.②실험방법:무균조건하취골수2.0～5.0 mL,채용percoll분리액화첩벽법획득순화적성인골수간충질간세포.③실험평고:류식세포의행세포표면항원검측,재괄당적조건하유도기분화위성골세포화지방세포.채용량보법향이도소분비세포유도,관찰기재감성성섬유세포생장인자、활화소A、이도소양생장인자、니극선알등인자자격하향이도소분비세포분화적동태변화.쌍류종염색감정이도양세포단,매련면역흡부시험검측세포분비이도소적정황,RT-PCR검측이도세포특이기인적표체.결과:①골수간충질간세포적생장특성급면역표형:분리배양획득적첩벽세포,정형태균일적사형,류식세포의검측CD34、CD45표체음성,CD29、CD44표체양성.②향성골세포화지방세포적유도분화:차류세포경천소홍염색、유홍O염색균정양성,가유도분화위성골세포화지방세포.③향이도소분비세포적유도분화:제1보유도후출현세포족,쌍류종염색불착색,이도소분비량소,부검측도PDX-1기인적표체,증실기위이도전체세포.제2보유도후세포족수목축점상승,지유도14 d대부분세포족경쌍류종염색도정홍색.④유도후배양상청중이도소함량:유도제3,7,14,21천적이도소분비량분별위(15.3±4.9),(34.1±5.6),(40.4±5.3),(39.8±5.1)mU/L.⑤이도세포특이기인적표체:유도7 d부검측도PDX-1기인적표체,insulin 1、insulin 2화Glut 2기인균불표체.유도14,21 d검측도insulin 2、PDX-1기인표체,insulin 1기인약표체,Glut 2기인불표체.결론:체외분리、순화득도적골수간충질간세포유도7 d가분화출이도전체세포,불구공능성;유도14 d후가성공지분화출성숙적구유공능성적이도소분비세포.
