CAJ | 학술논문

目的建立一种高效、简便、实用的分离纯化葡萄球菌蛋白A(SPA)的工艺.方法采用超声波破菌和IgC-Sepharose 4B亲和层析分离纯化SPA;以Lowry法检测蛋白含量;双向琼脂免疫扩散法测定效价和特异性;用还原和非还原SDS-PAGE法检测纯度和相对分子质量.结果此法制得的3批SPA的蛋白含量分别为4.7、4.4和5.4 mg/ml,收率分别为2.70、2.64和3.78g/100 g湿菌.对人IgG的免疫双扩散效价均为1:64;与正常人、豚鼠、家兔和小鼠的血清反应均出现一条沉淀线,而与鸡和羊不出现沉淀线.经非还原SDS-PAGE检测只呈现一条蛋白带,相对分子质量约为160 000～180 000;经还原SDS-PAGE检测呈现两条蛋白带,相对分子质量分别约为67 000和34 000.结论已成功建立了分离纯化SPA的新工艺.
목적 건립일충고효、간편、실용적분리순화포도구균단백A(SPA)적공예.방법 채용초성파파균화IgC-Sepharose 4B친화층석분리순화SPA;이Lowry법검측단백함량;쌍향경지면역확산법측정효개화특이성;용환원화비환원SDS-PAGE법검측순도화상대분자질량.결과 차법제득적3비SPA적단백함량분별위4.7、4.4화5.4 mg/ml,수솔분별위2.70、2.64화3.78g/100 g습균.대인IgG적면역쌍확산효개균위1:64;여정상인、돈서、가토화소서적혈청반응균출현일조침정선,이여계화양불출현침정선.경비환원SDS-PAGE검측지정현일조단백대,상대분자질량약위160 000～180 000;경환원SDS-PAGE검측정현량조단백대,상대분자질량분별약위67 000화34 000.결론 이성공건립료분리순화SPA적신공예.