CAJ | 학술논문

目的: 制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1) mAb进行比较. 方法: 经RT-PCR获得AR基因, 将基因插入Pgex- 4T-1(His)6C中, 构建重组质粒Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 以重组质粒转化E.coli Rosetta诱导表达GST-AR蛋白.以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定.使用Clustalx和 Antheprot软件, 比较AR与ARL-1的同源性, 表达GST-Dar[80～142氨基酸(aa)], 与ARL-1差异较大; 并分析AR的抗原性, 表达GST-Da1(1～79 aa)、GST-Da2(80～99 aa)、 GST-Da3(111～142 aa)、 GST-Da4(143～316 aa).利用AR全长及截短蛋白, 采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位.结果: 获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、 AR7B3G4和ARF10.3株抗GST-AR的 mAb均为IgG1(κ型), 腹水mAb效价为1∶ 4×105, 细胞培养上清mAb效价为1∶ 1×104, 3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应, 而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应.它们分别为抗GST-Da1、GST-Da3和GST-Da4蛋白的mAb.结论: 成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的 1～79、111～142、143～316位氨基酸.将它们与抗ARL-1 mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能, 并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具.
목적: 제비항철당환원매(AR)적단극륭항체(mAb),병여본실제비적항철당환원매상사단백(ARL-1) mAb진행비교. 방법: 경RT-PCR획득AR기인, 장기인삽입Pgex- 4T-1(His)6C중, 구건중조질립Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 이중조질립전화E.coli Rosetta유도표체GST-AR단백.이순화적GST-AR단백면역BALB/c소서, 채용잡교류기술제비mAb.응용간접ELISA화Western blot방법대mAb진행사선화감정.사용Clustalx화 Antheprot연건, 비교AR여ARL-1적동원성, 표체GST-Dar[80～142안기산(aa)], 여ARL-1차이교대; 병분석AR적항원성, 표체GST-Da1(1～79 aa)、GST-Da2(80～99 aa)、 GST-Da3(111～142 aa)、 GST-Da4(143～316 aa).이용AR전장급절단단백, 채용Western blot분석제비적항AR mAb식별AR항원적부위.결과: 획득3주은정분비항AR mAb적잡교류세포계ARB3、 AR7B3G4화ARF10.3주항GST-AR적 mAb균위IgG1(κ형), 복수mAb효개위1∶ 4×105, 세포배양상청mAb효개위1∶ 1×104, 3주mAb균가여태반조직중적AR단백기반응, 이여GST-ARL-1화GST단백무교차반응.타문분별위항GST-Da1、GST-Da3화GST-Da4단백적mAb.결론: 성공지제비료3주특이성항AR mAb,가분별식별AR적 1～79、111～142、143～316위안기산.장타문여항ARL-1 mAb연합응용,장유조우진일보연구AR여ARL-1단백적공능, 병위심입탐토AR、ARL-1여상관질병적관계급진행대규모적류행병학조사제공료유력적공구.