生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2005年
2期
141-143
,共3页
丁守怡%宋旭霞%牟文凤%闫志勇%钱冬萌%王斌
丁守怡%宋旭霞%牟文鳳%閆誌勇%錢鼕萌%王斌
정수이%송욱하%모문봉%염지용%전동맹%왕빈
SARS%冠状病毒%RT-PCR%重组
SARS%冠狀病毒%RT-PCR%重組
SARS%관상병독%RT-PCR%중조
构建SARS冠状病毒S基因序列克隆p-SARS-S,作为自行设计、建立的RT-PCR检测方法的阳性对照,并为该基因的表达奠定基础.设计合成了位于病毒基因21 504～22 136位的长633 bp的序列片断作为模板进行PCR扩增;将PCR产物与T-Easy载体连接,经过转化提取重组质粒DNA.对构建的阳性克隆进行PCR、酶切、测序鉴定.对经EcoRⅠ酶切鉴定为阳性的重组表达质粒测序,结果显示插入片段大小、方向、碱基匹配与预期一致.构建的阳性对照克隆p-SARS-S有助于建立严格的SARS病毒基因室内质控措施.
構建SARS冠狀病毒S基因序列剋隆p-SARS-S,作為自行設計、建立的RT-PCR檢測方法的暘性對照,併為該基因的錶達奠定基礎.設計閤成瞭位于病毒基因21 504～22 136位的長633 bp的序列片斷作為模闆進行PCR擴增;將PCR產物與T-Easy載體連接,經過轉化提取重組質粒DNA.對構建的暘性剋隆進行PCR、酶切、測序鑒定.對經EcoRⅠ酶切鑒定為暘性的重組錶達質粒測序,結果顯示插入片段大小、方嚮、堿基匹配與預期一緻.構建的暘性對照剋隆p-SARS-S有助于建立嚴格的SARS病毒基因室內質控措施.
구건SARS관상병독S기인서렬극륭p-SARS-S,작위자행설계、건립적RT-PCR검측방법적양성대조,병위해기인적표체전정기출.설계합성료위우병독기인21 504～22 136위적장633 bp적서렬편단작위모판진행PCR확증;장PCR산물여T-Easy재체련접,경과전화제취중조질립DNA.대구건적양성극륭진행PCR、매절、측서감정.대경EcoRⅠ매절감정위양성적중조표체질립측서,결과현시삽입편단대소、방향、감기필배여예기일치.구건적양성대조극륭p-SARS-S유조우건립엄격적SARS병독기인실내질공조시.
