中国预防医学杂志
中國預防醫學雜誌
중국예방의학잡지
CHINA PREVENTIVE MEDICINE
2007年
2期
113-115
,共3页
刘忠华%兰国伟%吕冰%陈创夫%万康林
劉忠華%蘭國偉%呂冰%陳創伕%萬康林
류충화%란국위%려빙%진창부%만강림
结核分枝杆菌%MPT64蛋白%克隆%表达%复性
結覈分枝桿菌%MPT64蛋白%剋隆%錶達%複性
결핵분지간균%MPT64단백%극륭%표체%복성
目的 构建结核分枝杆菌分泌蛋白MPT 64的重组质粒,并在大肠杆菌中表达及纯化和复性重组蛋白.方法 用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出mpt64基因片段,插入PKRX-T载体中,再亚克降到表达载体PET30a中,在大肠杆菌中表达;应用组氨酸标签(His-Tag)纯化重组蛋白;在PBS中通过半透膜恢复重组蛋白的天然结构.结果 构建了含MPT64重组质粒的大肠杆菌工程菌,并以包涵体形式表达重组蛋白MPT 64,其占细胞总蛋白的20%～30%;重组蛋白变性后经镍柱纯化,其纯度达90%以上;通过半透膜完全恢复重组蛋白的天然结构.结论 具有天然结构和高纯度的重组融合蛋白有可能成为有效的结核病血清学诊断的候选抗原.
目的 構建結覈分枝桿菌分泌蛋白MPT 64的重組質粒,併在大腸桿菌中錶達及純化和複性重組蛋白.方法 用PCR方法從結覈分枝桿菌H37Rv基因組中擴增齣mpt64基因片段,插入PKRX-T載體中,再亞剋降到錶達載體PET30a中,在大腸桿菌中錶達;應用組氨痠標籤(His-Tag)純化重組蛋白;在PBS中通過半透膜恢複重組蛋白的天然結構.結果 構建瞭含MPT64重組質粒的大腸桿菌工程菌,併以包涵體形式錶達重組蛋白MPT 64,其佔細胞總蛋白的20%～30%;重組蛋白變性後經鎳柱純化,其純度達90%以上;通過半透膜完全恢複重組蛋白的天然結構.結論 具有天然結構和高純度的重組融閤蛋白有可能成為有效的結覈病血清學診斷的候選抗原.
목적 구건결핵분지간균분비단백MPT 64적중조질립,병재대장간균중표체급순화화복성중조단백.방법 용PCR방법종결핵분지간균H37Rv기인조중확증출mpt64기인편단,삽입PKRX-T재체중,재아극강도표체재체PET30a중,재대장간균중표체;응용조안산표첨(His-Tag)순화중조단백;재PBS중통과반투막회복중조단백적천연결구.결과 구건료함MPT64중조질립적대장간균공정균,병이포함체형식표체중조단백MPT 64,기점세포총단백적20%～30%;중조단백변성후경얼주순화,기순도체90%이상;통과반투막완전회복중조단백적천연결구.결론 구유천연결구화고순도적중조융합단백유가능성위유효적결핵병혈청학진단적후선항원.
