西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2003年
4期
577-580
,共4页
高书颖%范三红%郭蔼光%朱帮福%陈苏民
高書穎%範三紅%郭藹光%硃幫福%陳囌民
고서영%범삼홍%곽애광%주방복%진소민
人骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)%烟草%根癌农杆菌介导法
人骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)%煙草%根癌農桿菌介導法
인골형성단백-3성숙태(hBMP-3m)%연초%근암농간균개도법
PCR扩增人骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)cDNA,纯化后连接入pUC19质粒,构建克隆载体pUC19B3m;用EcoRⅠ和HindⅢ酶解pUC19B3m和pJIT163,将目的片段插入pJIT163,构建中间载体pJIT163-B3m;再构建植物表达载体pCAMBIA1300-B3m.利用冻融法将质粒pCAMBIA-hBMP3m转入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404.以烟草(Nicotiana tabacum L.)无菌苗叶盘为外植体,通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化,获得了在含25 mg/L潮霉素(Hygromycin,Hyg)的筛选培养基上再生的抗性植株,经PCR证实其中部分植株已将人骨形成蛋白-3成熟肽基因整合到烟草基因组中,Western Blot结果表明已有微量BMP表达.
PCR擴增人骨形成蛋白-3成熟肽(hBMP-3m)cDNA,純化後連接入pUC19質粒,構建剋隆載體pUC19B3m;用EcoRⅠ和HindⅢ酶解pUC19B3m和pJIT163,將目的片段插入pJIT163,構建中間載體pJIT163-B3m;再構建植物錶達載體pCAMBIA1300-B3m.利用凍融法將質粒pCAMBIA-hBMP3m轉入根癌農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404.以煙草(Nicotiana tabacum L.)無菌苗葉盤為外植體,通過根癌農桿菌介導法進行遺傳轉化,穫得瞭在含25 mg/L潮黴素(Hygromycin,Hyg)的篩選培養基上再生的抗性植株,經PCR證實其中部分植株已將人骨形成蛋白-3成熟肽基因整閤到煙草基因組中,Western Blot結果錶明已有微量BMP錶達.
PCR확증인골형성단백-3성숙태(hBMP-3m)cDNA,순화후련접입pUC19질립,구건극륭재체pUC19B3m;용EcoRⅠ화HindⅢ매해pUC19B3m화pJIT163,장목적편단삽입pJIT163,구건중간재체pJIT163-B3m;재구건식물표체재체pCAMBIA1300-B3m.이용동융법장질립pCAMBIA-hBMP3m전입근암농간균(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404.이연초(Nicotiana tabacum L.)무균묘협반위외식체,통과근암농간균개도법진행유전전화,획득료재함25 mg/L조매소(Hygromycin,Hyg)적사선배양기상재생적항성식주,경PCR증실기중부분식주이장인골형성단백-3성숙태기인정합도연초기인조중,Western Blot결과표명이유미량BMP표체.
