中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2007年
11期
1222-1227
,共6页
邹立津%吕农华%冯文周%邹学农
鄒立津%呂農華%馮文週%鄒學農
추립진%려농화%풍문주%추학농
骨髓间充质干细胞%成骨细胞%分化%基因表达%猪
骨髓間充質榦細胞%成骨細胞%分化%基因錶達%豬
골수간충질간세포%성골세포%분화%기인표체%저
目的 观察家猪骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)在体外诱导条件下成骨分化的特征及相关基因的表达.方法 选取3月龄雌性长白猪6头,无菌条件下于胫骨近端抽取骨髓15 ml.采用密度梯度离心法并根据细胞贴壁特性对MSCs进行分离、纯化,倒置相差显微镜观察原代细胞生长情况,于培养第7天计算MSCs百分比含量及群体倍增值.将第1代细胞置于含1×10-8 mmol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)、10 mmol/L β-磷酸甘油(β-glycerophosphate,β-GP)和82 μg/ml抗坏血酸(ascorbic acid,Asc)的成骨诱导培养液中培养21 d,作为实验组;DMEM培养液中培养作为对照组.分别行细胞形态学观察、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)组织化学染色、钙沉积和细胞增殖测定,采用实时定量PCR分析成骨分化的相关基因表达.结果 原代MSCs特征:培养第1天,有核细胞大部分由悬浮的圆形血源性细胞组成;第3天换液弃除非贴壁细胞,MSCs克隆开始形成,细胞呈成纤维细胞样生长;第7天,镜下观察到大小不一的克隆.细胞在培养后12～14 d基本长满,原代细胞群体倍增值平均为13.MSCs成骨分化:诱导培养14 d实验组细胞形态由成纤维细胞样变成立方体样,而对照组细胞始终保持成纤维细胞样.培养5 d,对照组细胞计数为11 723±4 040,实验组为10 276±5 513,二者差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组相比,实验组诱导培养14 d,ALP染色呈强阳性,21 d钙沉积明显增加(P＜0.01).实验组MSCs成骨相关基因:核心结合因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)、osterix、ALP、Ⅰ型胶原、骨连接素(osteonectin,ON)、骨钙素(osteocalcin,OC)表达逐渐增强;Cbfα1、ALP、ON在分化早期增加明显;与第7天比较,第21天osterix和OC基因表达明显上调(P＜0.05);第14天,Ⅰ型胶原表达也上调(P＜0.05).结论 密度梯度离心法分离的猪MSCs,在体外诱导条件下能通过上调分化特异基因表达向成骨细胞分化.
目的 觀察傢豬骨髓間充質榦細胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)在體外誘導條件下成骨分化的特徵及相關基因的錶達.方法 選取3月齡雌性長白豬6頭,無菌條件下于脛骨近耑抽取骨髓15 ml.採用密度梯度離心法併根據細胞貼壁特性對MSCs進行分離、純化,倒置相差顯微鏡觀察原代細胞生長情況,于培養第7天計算MSCs百分比含量及群體倍增值.將第1代細胞置于含1×10-8 mmol/L地塞米鬆(dexamethasone,Dex)、10 mmol/L β-燐痠甘油(β-glycerophosphate,β-GP)和82 μg/ml抗壞血痠(ascorbic acid,Asc)的成骨誘導培養液中培養21 d,作為實驗組;DMEM培養液中培養作為對照組.分彆行細胞形態學觀察、堿性燐痠酶(alkaline phosphatase,ALP)組織化學染色、鈣沉積和細胞增殖測定,採用實時定量PCR分析成骨分化的相關基因錶達.結果 原代MSCs特徵:培養第1天,有覈細胞大部分由懸浮的圓形血源性細胞組成;第3天換液棄除非貼壁細胞,MSCs剋隆開始形成,細胞呈成纖維細胞樣生長;第7天,鏡下觀察到大小不一的剋隆.細胞在培養後12～14 d基本長滿,原代細胞群體倍增值平均為13.MSCs成骨分化:誘導培養14 d實驗組細胞形態由成纖維細胞樣變成立方體樣,而對照組細胞始終保持成纖維細胞樣.培養5 d,對照組細胞計數為11 723±4 040,實驗組為10 276±5 513,二者差異無統計學意義(P＞0.05).與對照組相比,實驗組誘導培養14 d,ALP染色呈彊暘性,21 d鈣沉積明顯增加(P＜0.01).實驗組MSCs成骨相關基因:覈心結閤因子α1(core binding factor α1,Cbfα1)、osterix、ALP、Ⅰ型膠原、骨連接素(osteonectin,ON)、骨鈣素(osteocalcin,OC)錶達逐漸增彊;Cbfα1、ALP、ON在分化早期增加明顯;與第7天比較,第21天osterix和OC基因錶達明顯上調(P＜0.05);第14天,Ⅰ型膠原錶達也上調(P＜0.05).結論 密度梯度離心法分離的豬MSCs,在體外誘導條件下能通過上調分化特異基因錶達嚮成骨細胞分化.
목적 관찰가저골수간충질간세포(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)재체외유도조건하성골분화적특정급상관기인적표체.방법 선취3월령자성장백저6두,무균조건하우경골근단추취골수15 ml.채용밀도제도리심법병근거세포첩벽특성대MSCs진행분리、순화,도치상차현미경관찰원대세포생장정황,우배양제7천계산MSCs백분비함량급군체배증치.장제1대세포치우함1×10-8 mmol/L지새미송(dexamethasone,Dex)、10 mmol/L β-린산감유(β-glycerophosphate,β-GP)화82 μg/ml항배혈산(ascorbic acid,Asc)적성골유도배양액중배양21 d,작위실험조;DMEM배양액중배양작위대조조.분별행세포형태학관찰、감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)조직화학염색、개침적화세포증식측정,채용실시정량PCR분석성골분화적상관기인표체.결과 원대MSCs특정:배양제1천,유핵세포대부분유현부적원형혈원성세포조성;제3천환액기제비첩벽세포,MSCs극륭개시형성,세포정성섬유세포양생장;제7천,경하관찰도대소불일적극륭.세포재배양후12～14 d기본장만,원대세포군체배증치평균위13.MSCs성골분화:유도배양14 d실험조세포형태유성섬유세포양변성립방체양,이대조조세포시종보지성섬유세포양.배양5 d,대조조세포계수위11 723±4 040,실험조위10 276±5 513,이자차이무통계학의의(P＞0.05).여대조조상비,실험조유도배양14 d,ALP염색정강양성,21 d개침적명현증가(P＜0.01).실험조MSCs성골상관기인:핵심결합인자α1(core binding factor α1,Cbfα1)、osterix、ALP、Ⅰ형효원、골련접소(osteonectin,ON)、골개소(osteocalcin,OC)표체축점증강;Cbfα1、ALP、ON재분화조기증가명현;여제7천비교,제21천osterix화OC기인표체명현상조(P＜0.05);제14천,Ⅰ형효원표체야상조(P＜0.05).결론 밀도제도리심법분리적저MSCs,재체외유도조건하능통과상조분화특이기인표체향성골세포분화.
