四川动物
四川動物
사천동물
SICHUAN JOURNAL OF ZOOLOGY
2008年
1期
26-30
,共5页
殷俊%茅慧华%杨玲%李厚达
慇俊%茅慧華%楊玲%李厚達
은준%모혜화%양령%리후체
γ-干扰素%逆转录病毒%载体构建%筛选
γ-榦擾素%逆轉錄病毒%載體構建%篩選
γ-간우소%역전록병독%재체구건%사선
本研究自小鼠脾脏淋巴细胞中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增出mIFN-γ基因,按常规方法构建T载体克隆,酶切鉴定,测序分析.结果表明:获得mIFN-γ基因全长为468 bp,与GenBank中已发表的mIFN-γ基因核苷酸同源性为100%.通过双酶切将该基因片段插入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,脂质体法共转染包装细胞293T ,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h 后,加入Zeocin 进行筛选,挑选出能稳定表达抗性的细胞株,经RT-PCR检测出转基因L929细胞株中mIFN-γ基因的转录.结果表明: 构建了含mIFN-γ基因的重组逆转录病毒载体,并筛选出整合有mIFN-γ基因的L929细胞株,为基因治疗的后续研究和大鼠单克隆抗体的研制奠定了基础.
本研究自小鼠脾髒淋巴細胞中抽提總RNA,應用RT-PCR技術擴增齣mIFN-γ基因,按常規方法構建T載體剋隆,酶切鑒定,測序分析.結果錶明:穫得mIFN-γ基因全長為468 bp,與GenBank中已髮錶的mIFN-γ基因覈苷痠同源性為100%.通過雙酶切將該基因片段插入逆轉錄病毒載體pGEZ-Term中,脂質體法共轉染包裝細胞293T ,用含有完整病毒顆粒的293T細胞的培養上清感染L929細胞,72 h 後,加入Zeocin 進行篩選,挑選齣能穩定錶達抗性的細胞株,經RT-PCR檢測齣轉基因L929細胞株中mIFN-γ基因的轉錄.結果錶明: 構建瞭含mIFN-γ基因的重組逆轉錄病毒載體,併篩選齣整閤有mIFN-γ基因的L929細胞株,為基因治療的後續研究和大鼠單剋隆抗體的研製奠定瞭基礎.
본연구자소서비장림파세포중추제총RNA,응용RT-PCR기술확증출mIFN-γ기인,안상규방법구건T재체극륭,매절감정,측서분석.결과표명:획득mIFN-γ기인전장위468 bp,여GenBank중이발표적mIFN-γ기인핵감산동원성위100%.통과쌍매절장해기인편단삽입역전록병독재체pGEZ-Term중,지질체법공전염포장세포293T ,용함유완정병독과립적293T세포적배양상청감염L929세포,72 h 후,가입Zeocin 진행사선,도선출능은정표체항성적세포주,경RT-PCR검측출전기인L929세포주중mIFN-γ기인적전록.결과표명: 구건료함mIFN-γ기인적중조역전록병독재체,병사선출정합유mIFN-γ기인적L929세포주,위기인치료적후속연구화대서단극륭항체적연제전정료기출.
