微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2000年
4期
384-388
,共5页
何秀萍%蔡向荣%怀文辉%张博润
何秀萍%蔡嚮榮%懷文輝%張博潤
하수평%채향영%부문휘%장박윤
桑蚕%金属硫蛋白基因%克隆和表达
桑蠶%金屬硫蛋白基因%剋隆和錶達
상잠%금속류단백기인%극륭화표체
用BamHI和Sac I双酶切质粒pCM1-1,获得酵母的MTI基因片段,用非放射性地高辛标记作为探针.提取桑蚕肥苏蚕卵的总DNA,分别用EcoRI、BamHI和HindⅢ酶切,与MTI探针进行Southem杂交,出现较强的杂交信号.然后用EcoR I完全酶切桑吞的总DNA,电洗脱法回收1～6kb的染色体片断,与EcoRI酶切的M13-载体以3:1比例连接,转化受体菌DH5a.筛选到4000多个白色转化子,与探针MTI进行Southern杂交筛选阳性转化子,选择到有强杂交信号的三个转化子[编号为T1(pZHC-1)、T5(pZHC-5)、T7(pZHC-7)].用12种限制性内切酶对pZHC-5重组质粒进行酶切分析表明插入片段约1.2kb,在基因内有一个HindⅢ位点.抗性测定表明受体菌DH5a在含有5.0mmol/L CuSO4的培养基上生长,在含有5.2mmol/LCuSO4的培养基上不生长,而转化子确能在含有5.2mmol/L CuSO4以上的培养基上生长.上述研究结果表明1.2kb左右的插入片段含有桑吞的金属硫蛋白基因.
用BamHI和Sac I雙酶切質粒pCM1-1,穫得酵母的MTI基因片段,用非放射性地高辛標記作為探針.提取桑蠶肥囌蠶卵的總DNA,分彆用EcoRI、BamHI和HindⅢ酶切,與MTI探針進行Southem雜交,齣現較彊的雜交信號.然後用EcoR I完全酶切桑吞的總DNA,電洗脫法迴收1～6kb的染色體片斷,與EcoRI酶切的M13-載體以3:1比例連接,轉化受體菌DH5a.篩選到4000多箇白色轉化子,與探針MTI進行Southern雜交篩選暘性轉化子,選擇到有彊雜交信號的三箇轉化子[編號為T1(pZHC-1)、T5(pZHC-5)、T7(pZHC-7)].用12種限製性內切酶對pZHC-5重組質粒進行酶切分析錶明插入片段約1.2kb,在基因內有一箇HindⅢ位點.抗性測定錶明受體菌DH5a在含有5.0mmol/L CuSO4的培養基上生長,在含有5.2mmol/LCuSO4的培養基上不生長,而轉化子確能在含有5.2mmol/L CuSO4以上的培養基上生長.上述研究結果錶明1.2kb左右的插入片段含有桑吞的金屬硫蛋白基因.
용BamHI화Sac I쌍매절질립pCM1-1,획득효모적MTI기인편단,용비방사성지고신표기작위탐침.제취상잠비소잠란적총DNA,분별용EcoRI、BamHI화HindⅢ매절,여MTI탐침진행Southem잡교,출현교강적잡교신호.연후용EcoR I완전매절상탄적총DNA,전세탈법회수1～6kb적염색체편단,여EcoRI매절적M13-재체이3:1비례련접,전화수체균DH5a.사선도4000다개백색전화자,여탐침MTI진행Southern잡교사선양성전화자,선택도유강잡교신호적삼개전화자[편호위T1(pZHC-1)、T5(pZHC-5)、T7(pZHC-7)].용12충한제성내절매대pZHC-5중조질립진행매절분석표명삽입편단약1.2kb,재기인내유일개HindⅢ위점.항성측정표명수체균DH5a재함유5.0mmol/L CuSO4적배양기상생장,재함유5.2mmol/LCuSO4적배양기상불생장,이전화자학능재함유5.2mmol/L CuSO4이상적배양기상생장.상술연구결과표명1.2kb좌우적삽입편단함유상탄적금속류단백기인.
