江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2000年
4期
264-266
,共3页
傅建新%王玮%王玲%朱子玲%陈子兴
傅建新%王瑋%王玲%硃子玲%陳子興
부건신%왕위%왕령%주자령%진자흥
逆转录病毒%基因转移%基因治疗%基因,MDR%基因表达
逆轉錄病毒%基因轉移%基因治療%基因,MDR%基因錶達
역전록병독%기인전이%기인치료%기인,MDR%기인표체
目的建立多药耐药基因MDR1的逆转录病毒转移系统.方法脂质体转染法将携带MDR1基因的逆转录病毒载体HaMDR导入单向型包装细胞GP+E86;用获得的单向型病毒重复转导双嗜型包装细胞GP+envAm12,经秋水仙碱加压选择获得高滴度的病毒生产细胞Am12/HaMDR;MDR1基因的转移和表达用聚合酶链反应(PCR)、MTT比色法和流式细胞术(FCM)分析.结果单向型与双嗜型病毒生产细胞的滴度分别为6.2×105和9.0×105CFU/ml;PCR分析证实生产细胞有MDR1基因整合并稳定表达,但同时存在异常剪接的转录本;MTT比色法和FCM分析显示MDR1基因转移细胞的耐药程度提高12～267倍,P-糖蛋白表达率达97%～99%.结论逆转录病毒可有效介导MDR1基因转移和表达,为导入造血干/祖细胞后进行根治性化疗奠定基础.
目的建立多藥耐藥基因MDR1的逆轉錄病毒轉移繫統.方法脂質體轉染法將攜帶MDR1基因的逆轉錄病毒載體HaMDR導入單嚮型包裝細胞GP+E86;用穫得的單嚮型病毒重複轉導雙嗜型包裝細胞GP+envAm12,經鞦水仙堿加壓選擇穫得高滴度的病毒生產細胞Am12/HaMDR;MDR1基因的轉移和錶達用聚閤酶鏈反應(PCR)、MTT比色法和流式細胞術(FCM)分析.結果單嚮型與雙嗜型病毒生產細胞的滴度分彆為6.2×105和9.0×105CFU/ml;PCR分析證實生產細胞有MDR1基因整閤併穩定錶達,但同時存在異常剪接的轉錄本;MTT比色法和FCM分析顯示MDR1基因轉移細胞的耐藥程度提高12～267倍,P-糖蛋白錶達率達97%～99%.結論逆轉錄病毒可有效介導MDR1基因轉移和錶達,為導入造血榦/祖細胞後進行根治性化療奠定基礎.
목적건립다약내약기인MDR1적역전록병독전이계통.방법지질체전염법장휴대MDR1기인적역전록병독재체HaMDR도입단향형포장세포GP+E86;용획득적단향형병독중복전도쌍기형포장세포GP+envAm12,경추수선감가압선택획득고적도적병독생산세포Am12/HaMDR;MDR1기인적전이화표체용취합매련반응(PCR)、MTT비색법화류식세포술(FCM)분석.결과단향형여쌍기형병독생산세포적적도분별위6.2×105화9.0×105CFU/ml;PCR분석증실생산세포유MDR1기인정합병은정표체,단동시존재이상전접적전록본;MTT비색법화FCM분석현시MDR1기인전이세포적내약정도제고12～267배,P-당단백표체솔체97%～99%.결론역전록병독가유효개도MDR1기인전이화표체,위도입조혈간/조세포후진행근치성화료전정기출.
