中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
1998年
2期
114-120
,共7页
马强中%吴易元%雷薇%遇珑%王洪平%张友会
馬彊中%吳易元%雷薇%遇瓏%王洪平%張友會
마강중%오역원%뢰미%우롱%왕홍평%장우회
甲胎蛋白%基因转录调控%基因治疗%载体
甲胎蛋白%基因轉錄調控%基因治療%載體
갑태단백%기인전록조공%기인치료%재체
目的为构建高效利用甲胎蛋白(AFP)基因转录调控元件(TREs),驱动治疗基因在肝癌细胞中特异性表达的基因治疗载体,对天然人AFP TREs进行改建和鉴定.方法采用亚克隆技术,删除了天然人AFP TREs中含有沉默子活性的-0.87～-3.06kb区域,将具有增强子活性的-3.06～-5.1kb片段和调控AFP基因表达的启动子"核心"区域+29～-870 bp片段连接,获得经人工改造后的基因转录调控元件,命名为AFP(e/p)TREs.用报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)表达法测定TREs的活性和特异性.结果AFP(e/p)TREs在人肝癌细胞FepG2中的活性是天然人AFP TREs的1.8倍,并只能使CAT基因在AFP阳性的HepG2细胞中表达而不在喉癌Hep2细胞中表达.结论改建后的AFP(e/p)TREs较天然的人AFP TREs长度缩短,具有更高的活性并仍具有肝癌细胞特异性,适合用于肝癌特异性表达基因治疗载体的构建.
目的為構建高效利用甲胎蛋白(AFP)基因轉錄調控元件(TREs),驅動治療基因在肝癌細胞中特異性錶達的基因治療載體,對天然人AFP TREs進行改建和鑒定.方法採用亞剋隆技術,刪除瞭天然人AFP TREs中含有沉默子活性的-0.87～-3.06kb區域,將具有增彊子活性的-3.06～-5.1kb片段和調控AFP基因錶達的啟動子"覈心"區域+29～-870 bp片段連接,穫得經人工改造後的基因轉錄調控元件,命名為AFP(e/p)TREs.用報告基因氯黴素乙酰轉移酶(CAT)錶達法測定TREs的活性和特異性.結果AFP(e/p)TREs在人肝癌細胞FepG2中的活性是天然人AFP TREs的1.8倍,併隻能使CAT基因在AFP暘性的HepG2細胞中錶達而不在喉癌Hep2細胞中錶達.結論改建後的AFP(e/p)TREs較天然的人AFP TREs長度縮短,具有更高的活性併仍具有肝癌細胞特異性,適閤用于肝癌特異性錶達基因治療載體的構建.
목적위구건고효이용갑태단백(AFP)기인전록조공원건(TREs),구동치료기인재간암세포중특이성표체적기인치료재체,대천연인AFP TREs진행개건화감정.방법채용아극륭기술,산제료천연인AFP TREs중함유침묵자활성적-0.87～-3.06kb구역,장구유증강자활성적-3.06～-5.1kb편단화조공AFP기인표체적계동자"핵심"구역+29～-870 bp편단련접,획득경인공개조후적기인전록조공원건,명명위AFP(e/p)TREs.용보고기인록매소을선전이매(CAT)표체법측정TREs적활성화특이성.결과AFP(e/p)TREs재인간암세포FepG2중적활성시천연인AFP TREs적1.8배,병지능사CAT기인재AFP양성적HepG2세포중표체이불재후암Hep2세포중표체.결론개건후적AFP(e/p)TREs교천연적인AFP TREs장도축단,구유경고적활성병잉구유간암세포특이성,괄합용우간암특이성표체기인치료재체적구건.
