中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2000年
5期
20-24
,共5页
谢勇恩%鲍朗%晏菊芳%邱洪宇%方之茂%张会东
謝勇恩%鮑朗%晏菊芳%邱洪宇%方之茂%張會東
사용은%포랑%안국방%구홍우%방지무%장회동
莱姆病螺旋体%原浆柱蛋白特异性区段%基因克隆%表达
萊姆病螺鏇體%原漿柱蛋白特異性區段%基因剋隆%錶達
래모병라선체%원장주단백특이성구단%기인극륭%표체
目的为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原.方法根据莱姆病螺旋体83kD原浆柱蛋白(p83)特异性区段的基因序列,设计一对引物,采用PCR技术从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增p83特异性区段的基因片段,纯化扩增产物,用BamHI和Ec oRI双酶切后定向克隆入质粒载体pBK-CMV;转化大肠杆菌筛选重组克隆.用BamHI和EcoRI双酶切、PCR扩增和DNA序列测定对重组质粒进行鉴定,将重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达后进行SPS-PAGE和Western-blotting分析.结果 1)从莱姆病螺旋体B31株基因组DNA中扩增出p83特异性区段的基因片段;2)将扩增所得的目的基因片段正向插入pBK-CMV的BamHI 和EcoRI位点,获得重组质粒pBX1.3)pBX1在大肠杆菌中诱导表达后获得29kD含β-半乳糖苷酶氨基末端片段的重组抗原.结论成功构建了莱姆病螺旋体83kD原浆柱蛋白特异性区段的基因重组表达载体,并在大肠杆菌中获得了稳定的表达,为进一步研究该重组抗原在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础.
目的為萊姆病血清學診斷和基因工程亞單位疫苗研製提供靶抗原.方法根據萊姆病螺鏇體83kD原漿柱蛋白(p83)特異性區段的基因序列,設計一對引物,採用PCR技術從萊姆病螺鏇體B31株基因組DNA中擴增p83特異性區段的基因片段,純化擴增產物,用BamHI和Ec oRI雙酶切後定嚮剋隆入質粒載體pBK-CMV;轉化大腸桿菌篩選重組剋隆.用BamHI和EcoRI雙酶切、PCR擴增和DNA序列測定對重組質粒進行鑒定,將重組質粒轉化大腸桿菌,IPTG誘導錶達後進行SPS-PAGE和Western-blotting分析.結果 1)從萊姆病螺鏇體B31株基因組DNA中擴增齣p83特異性區段的基因片段;2)將擴增所得的目的基因片段正嚮插入pBK-CMV的BamHI 和EcoRI位點,穫得重組質粒pBX1.3)pBX1在大腸桿菌中誘導錶達後穫得29kD含β-半乳糖苷酶氨基末耑片段的重組抗原.結論成功構建瞭萊姆病螺鏇體83kD原漿柱蛋白特異性區段的基因重組錶達載體,併在大腸桿菌中穫得瞭穩定的錶達,為進一步研究該重組抗原在萊姆病血清學診斷和基因工程亞單位疫苗研製中的應用奠定瞭基礎.
목적위래모병혈청학진단화기인공정아단위역묘연제제공파항원.방법근거래모병라선체83kD원장주단백(p83)특이성구단적기인서렬,설계일대인물,채용PCR기술종래모병라선체B31주기인조DNA중확증p83특이성구단적기인편단,순화확증산물,용BamHI화Ec oRI쌍매절후정향극륭입질립재체pBK-CMV;전화대장간균사선중조극륭.용BamHI화EcoRI쌍매절、PCR확증화DNA서렬측정대중조질립진행감정,장중조질립전화대장간균,IPTG유도표체후진행SPS-PAGE화Western-blotting분석.결과 1)종래모병라선체B31주기인조DNA중확증출p83특이성구단적기인편단;2)장확증소득적목적기인편단정향삽입pBK-CMV적BamHI 화EcoRI위점,획득중조질립pBX1.3)pBX1재대장간균중유도표체후획득29kD함β-반유당감매안기말단편단적중조항원.결론성공구건료래모병라선체83kD원장주단백특이성구단적기인중조표체재체,병재대장간균중획득료은정적표체,위진일보연구해중조항원재래모병혈청학진단화기인공정아단위역묘연제중적응용전정료기출.
