人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达
인종류배사인자α기인천사표체재체적구건화재어성조7120중적표체
  • 万方数据
    中国科学C辑 중국과학C집
    SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
    1999年 2期 217-224 ,共8页

    刘凤龙%张宏斌%施定基%商之狄%林晨%邵宁%彭国宏%张雪艳%张海霞%吴锦银%王捷%徐旭东%江悦华%钟泽璞%赵树进%吴昊%曾呈奎

    류봉룡%장굉빈%시정기%상지적%림신%소저%팽국굉%장설염%장해하%오금은%왕첩%서욱동%강열화%종택박%조수진%오호%증정규

    人肿瘤坏死因子α%鱼腥藻7120%穿梭表达载体%三亲接合转移%Southern和Western%印迹细胞毒活性 人腫瘤壞死因子α%魚腥藻7120%穿梭錶達載體%三親接閤轉移%Southern和Western%印跡細胞毒活性
    인종류배사인자α%어성조7120%천사표체재체%삼친접합전이%Southern화Western%인적세포독활성
    报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻7120中的表达和鉴定结果. 将质粒pRL-rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL-439质粒上的PpsbA启动子下游,得到中间载体pRL-TC. 进一步与穿梭质粒pDC-8重组,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC-TNF. pRL-rhTNF,pRL-TC和pDC-TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为11.8%, 16.9%和15.0%. 通过三亲接合转移将pDC-TNF引入鱼腥藻7120中并获稳定遗传的转基因株. 从转基因的鱼腥藻7120中检测到pDC-TNF质粒的存在,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应. 抽提转基因藻的蛋白样品进行检测,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应. 采用TNF对L929细胞的细胞毒性方法,证明转基因藻粗提液中,TNF确有细胞毒活性.
    보도료인종류배사인자α(hTNFα)기인천사표체재체적구건급기재사상체람조어성조7120중적표체화감정결과. 장질립pRL-rhTNF상hTNFα적cDNA련우pRL-439질립상적PpsbA계동자하유,득도중간재체pRL-TC. 진일보여천사질립pDC-8중조,득도가재대장간균화람조중균가표체적천사표체재체pDC-TNF. pRL-rhTNF,pRL-TC화pDC-TNF삼자재대장간균중적표체량분별위11.8%, 16.9%화15.0%. 통과삼친접합전이장pDC-TNF인입어성조7120중병획은정유전적전기인주. 종전기인적어성조7120중검측도pDC-TNF질립적존재,차재화TNFα적cDNA탐침진행적Southern잡교중정양성반응. 추제전기인조적단백양품진행검측,재Western인적중화TNFα단극륭항체정양성반응. 채용TNF대L929세포적세포독성방법,증명전기인조조제액중,TNF학유세포독활성.
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