中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
1999年
4期
435-441
,共7页
高啸波%卢大儒%邱信芳%薛京伦
高嘯波%盧大儒%邱信芳%薛京倫
고소파%로대유%구신방%설경륜
狗皮肤成纤维细胞%反转录病毒载体%狗凝血因子Ⅸ%基因转移%基因治疗
狗皮膚成纖維細胞%反轉錄病毒載體%狗凝血因子Ⅸ%基因轉移%基因治療
구피부성섬유세포%반전록병독재체%구응혈인자Ⅸ%기인전이%기인치료
根据cFⅨ cDNA(canine FⅨ,cFⅨ)顺序设计引物,采用RT-PCR技术,从狗肝细胞中提取mRNA,逆转录成cFⅨ cDNA,克隆到pGEM-T质粒载体上,经DNA顺序分析,挑选克隆,拼接并测序鉴定,得到DNA顺序完全正确且含有cFⅨ完整编码区的cDNA,进一步构建成以G1Na为框架的反转录病毒载体G1NaCcⅨ(hCMV启动子控制cFⅨ转录)和G1NaMBcⅨ(MCK增强子和β-actin启动子共同控制cFⅨ转录),并用于反转录病毒介导的基因转移.狗原代皮肤成纤维细胞实验结果显示,cFⅨ能够在狗皮肤成纤维细胞中表达,表达水平分别为G1NaCcⅨ:173 ng/106 细胞.24 h;G1NaMBcⅨ:211ng/106细胞.24 h.此结果为血友病B狗基因治疗动物试验的开展奠定了基础.
根據cFⅨ cDNA(canine FⅨ,cFⅨ)順序設計引物,採用RT-PCR技術,從狗肝細胞中提取mRNA,逆轉錄成cFⅨ cDNA,剋隆到pGEM-T質粒載體上,經DNA順序分析,挑選剋隆,拼接併測序鑒定,得到DNA順序完全正確且含有cFⅨ完整編碼區的cDNA,進一步構建成以G1Na為框架的反轉錄病毒載體G1NaCcⅨ(hCMV啟動子控製cFⅨ轉錄)和G1NaMBcⅨ(MCK增彊子和β-actin啟動子共同控製cFⅨ轉錄),併用于反轉錄病毒介導的基因轉移.狗原代皮膚成纖維細胞實驗結果顯示,cFⅨ能夠在狗皮膚成纖維細胞中錶達,錶達水平分彆為G1NaCcⅨ:173 ng/106 細胞.24 h;G1NaMBcⅨ:211ng/106細胞.24 h.此結果為血友病B狗基因治療動物試驗的開展奠定瞭基礎.
근거cFⅨ cDNA(canine FⅨ,cFⅨ)순서설계인물,채용RT-PCR기술,종구간세포중제취mRNA,역전록성cFⅨ cDNA,극륭도pGEM-T질립재체상,경DNA순서분석,도선극륭,병접병측서감정,득도DNA순서완전정학차함유cFⅨ완정편마구적cDNA,진일보구건성이G1Na위광가적반전록병독재체G1NaCcⅨ(hCMV계동자공제cFⅨ전록)화G1NaMBcⅨ(MCK증강자화β-actin계동자공동공제cFⅨ전록),병용우반전록병독개도적기인전이.구원대피부성섬유세포실험결과현시,cFⅨ능구재구피부성섬유세포중표체,표체수평분별위G1NaCcⅨ:173 ng/106 세포.24 h;G1NaMBcⅨ:211ng/106세포.24 h.차결과위혈우병B구기인치료동물시험적개전전정료기출.
