CAJ | 학술논문

丙氨酸脱氢酶(EC 1.4.1.1)可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸和NADH.它是生物体内的氨基酸代谢和氨同化途径的关键酶.在地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32中,丙氨酸脱氢酶的活力与力复霉素的生物合成有负相关现象,其活力受KNO3全局效应的调控.根据结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)和天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)的丙氨酸脱氢酶氨基酸的保守序列和地中海拟无枝菌酸菌U32对氨基酸密码子的使用偏好,设计一对简并PCR引物.以此引物从地中海拟无枝菌酸菌U32中扩增到一555bp的片段,并以此片段为探针从地中海拟无枝菌酸菌U32 基因组cosmid文库中成功的克隆到了丙氨酸脱氢酶结构基因(ald).它编码了一个371个氨基酸的蛋白质,基因的GC含量为72.5%,符合链霉菌的基因结构特征.在起始密码子的上游6个碱基处,有一典型的链霉菌核糖体结合位点(RBS):AGGAGG,第75位的氨基酸为赖氨酸,是丙酮酸结合位点.以pET28b为载体,在E.coli BL21(DE3)中高效表达了ald基因.用IPTG在22℃时诱导得到的丙氨酸脱氢酶活力最高.用His-Tag柱纯化了表达的丙氨酸脱氢酶.酶学性质研究表明该酶专一性以L-Ala和NAD(H)为底物.
병안산탈경매(EC 1.4.1.1)가역최화병안산탈안생성병동산화NADH.타시생물체내적안기산대사화안동화도경적관건매.재지중해의무지균산균(Amycolatopsis mediterranei)U32중,병안산탈경매적활력여력복매소적생물합성유부상관현상,기활력수KNO3전국효응적조공.근거결핵분지간균(Mycobacterium tuberculosis)화천람련매균(Streptomyces coelicolor)적병안산탈경매안기산적보수서렬화지중해의무지균산균U32대안기산밀마자적사용편호,설계일대간병PCR인물.이차인물종지중해의무지균산균U32중확증도일555bp적편단,병이차편단위탐침종지중해의무지균산균U32 기인조cosmid문고중성공적극륭도료병안산탈경매결구기인(ald).타편마료일개371개안기산적단백질,기인적GC함량위72.5%,부합련매균적기인결구특정.재기시밀마자적상유6개감기처,유일전형적련매균핵당체결합위점(RBS):AGGAGG,제75위적안기산위뢰안산,시병동산결합위점.이pET28b위재체,재E.coli BL21(DE3)중고효표체료ald기인.용IPTG재22℃시유도득도적병안산탈경매활력최고.용His-Tag주순화료표체적병안산탈경매.매학성질연구표명해매전일성이L-Ala화NAD(H)위저물.