生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2002年
1期
35-39
,共5页
叶传忠%赵旭东%张芳%林震%许明%张永康%陈常庆
葉傳忠%趙旭東%張芳%林震%許明%張永康%陳常慶
협전충%조욱동%장방%림진%허명%장영강%진상경
前列腺特异膜抗原膜外区%原核表达%亲和层析%抗体
前列腺特異膜抗原膜外區%原覈錶達%親和層析%抗體
전렬선특이막항원막외구%원핵표체%친화층석%항체
利用RT-PCR技术,从前列腺癌组织总RNA中扩增人前列腺特异膜抗原(PSMA)基因编码区序列,克隆至pcDNA3.1载体,以此为模板再次PCR扩增出PSMA膜外区cDNA(edPSMA),序列测定表明克隆获得的PSMA及edPSMA与基因库所登录的序列相一致.构建原核表达质粒pMAL-c2x-edPSMA,经IPTG诱导表达的MBP-edPSMA融合蛋白分子量约120 kD,Western blot证实表达产物可特异地与PSMA单克隆抗体4G5结合.用直链淀粉琼脂糖凝胶(Amylose resin)亲和层析纯化蛋白质可得到电泳均一的融合蛋白,免疫BALB/C小鼠制备多抗,获得效价为1:12800的多克隆抗体,该抗体可用于前列腺癌组织标本PSMA表达的检测.
利用RT-PCR技術,從前列腺癌組織總RNA中擴增人前列腺特異膜抗原(PSMA)基因編碼區序列,剋隆至pcDNA3.1載體,以此為模闆再次PCR擴增齣PSMA膜外區cDNA(edPSMA),序列測定錶明剋隆穫得的PSMA及edPSMA與基因庫所登錄的序列相一緻.構建原覈錶達質粒pMAL-c2x-edPSMA,經IPTG誘導錶達的MBP-edPSMA融閤蛋白分子量約120 kD,Western blot證實錶達產物可特異地與PSMA單剋隆抗體4G5結閤.用直鏈澱粉瓊脂糖凝膠(Amylose resin)親和層析純化蛋白質可得到電泳均一的融閤蛋白,免疫BALB/C小鼠製備多抗,穫得效價為1:12800的多剋隆抗體,該抗體可用于前列腺癌組織標本PSMA錶達的檢測.
이용RT-PCR기술,종전렬선암조직총RNA중확증인전렬선특이막항원(PSMA)기인편마구서렬,극륭지pcDNA3.1재체,이차위모판재차PCR확증출PSMA막외구cDNA(edPSMA),서렬측정표명극륭획득적PSMA급edPSMA여기인고소등록적서렬상일치.구건원핵표체질립pMAL-c2x-edPSMA,경IPTG유도표체적MBP-edPSMA융합단백분자량약120 kD,Western blot증실표체산물가특이지여PSMA단극륭항체4G5결합.용직련정분경지당응효(Amylose resin)친화층석순화단백질가득도전영균일적융합단백,면역BALB/C소서제비다항,획득효개위1:12800적다극륭항체,해항체가용우전렬선암조직표본PSMA표체적검측.
