中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2001年
6期
761-765
,共5页
马雁冰%李擎%谢天宏%李鸿钧%江宏映%戴长柏%孙茂盛
馬雁冰%李擎%謝天宏%李鴻鈞%江宏映%戴長柏%孫茂盛
마안빙%리경%사천굉%리홍균%강굉영%대장백%손무성
角质细胞生长因子-2%基因克隆%表达%纯化
角質細胞生長因子-2%基因剋隆%錶達%純化
각질세포생장인자-2%기인극륭%표체%순화
从人胚肺二倍体细胞KMB17中抽提总RNA,经RT-PCR扩增获得编码人角质细胞生长因子-2(keratinocyte growth factor-2,KGF-2)的cDNA.克隆于硫氧环蛋白表达载体pThioHisA,序列分析表明与文献报道一致.经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21中实现高效表达,表达量可达菌体总蛋白10%～15%.菌体超声破碎,上清经CM-Sepharose FF阳离子交换,Heparin-Sepharose亲和层析,Superdex 75凝胶过滤层析纯化得到重组人KGF-2,纯度高于95%.生物活性分析表明,它能够促进成纤维细胞NIH/3T3的增殖,诱导鸡胚背根神经结神经轴突的生长,促进鸡胚尿囊膜血管生成.研究结果表明,获得了95%纯度的具有生物学活性的重组人KGF-2,为进一步的基础与应用研究提供了基础.
從人胚肺二倍體細胞KMB17中抽提總RNA,經RT-PCR擴增穫得編碼人角質細胞生長因子-2(keratinocyte growth factor-2,KGF-2)的cDNA.剋隆于硫氧環蛋白錶達載體pThioHisA,序列分析錶明與文獻報道一緻.經IPTG誘導,在大腸桿菌BL21中實現高效錶達,錶達量可達菌體總蛋白10%～15%.菌體超聲破碎,上清經CM-Sepharose FF暘離子交換,Heparin-Sepharose親和層析,Superdex 75凝膠過濾層析純化得到重組人KGF-2,純度高于95%.生物活性分析錶明,它能夠促進成纖維細胞NIH/3T3的增殖,誘導鷄胚揹根神經結神經軸突的生長,促進鷄胚尿囊膜血管生成.研究結果錶明,穫得瞭95%純度的具有生物學活性的重組人KGF-2,為進一步的基礎與應用研究提供瞭基礎.
종인배폐이배체세포KMB17중추제총RNA,경RT-PCR확증획득편마인각질세포생장인자-2(keratinocyte growth factor-2,KGF-2)적cDNA.극륭우류양배단백표체재체pThioHisA,서렬분석표명여문헌보도일치.경IPTG유도,재대장간균BL21중실현고효표체,표체량가체균체총단백10%～15%.균체초성파쇄,상청경CM-Sepharose FF양리자교환,Heparin-Sepharose친화층석,Superdex 75응효과려층석순화득도중조인KGF-2,순도고우95%.생물활성분석표명,타능구촉진성섬유세포NIH/3T3적증식,유도계배배근신경결신경축돌적생장,촉진계배뇨낭막혈관생성.연구결과표명,획득료95%순도적구유생물학활성적중조인KGF-2,위진일보적기출여응용연구제공료기출.
