哈尔滨医科大学学报
哈爾濱醫科大學學報
합이빈의과대학학보
JOURNAL OF HARBIN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
6期
563-567
,共5页
肇晓光%马洪星%张宇雯%董兴丽%刘兴汉
肇曉光%馬洪星%張宇雯%董興麗%劉興漢
조효광%마홍성%장우문%동흥려%류흥한
抗菌肽%SMAP-29衍生物%改造%原核表达%纯化
抗菌肽%SMAP-29衍生物%改造%原覈錶達%純化
항균태%SMAP-29연생물%개조%원핵표체%순화
目的 利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化.方法 化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠埃希菌BL-21(DE3),酶切和测序鉴定后,用异硫代β-D-半乳糖昔(isopropyl β-D-thiogalactoside IPTG)诱导表达融合蛋白.经几丁质亲和层析柱纯化.结果 化学合成的抗菌肽SMAP-29衍生物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的编码基因按正确方向和序列插入表达载体,融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的40%,几丁质亲和层析后获得了可溶性SMAP-29衍生物.结论 成功构建了以融合蛋白形式表达的抗菌肽SMAP-29衍生物大肠杆菌基因工程菌,克服了抗菌肽对宿主菌的毒性,实现了用大肠杆菌高效表达和一步亲和层析纯化,为进一步检测活性及临床应用奠定了基础.
目的 利用大腸桿菌錶達繫統錶達具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步親和層析法進行純化.方法 化學閤成經改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,紙片擴散法檢測抗菌活性後,人工併用閤成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,剋隆到錶達載體pTYB11上,轉化大腸埃希菌BL-21(DE3),酶切和測序鑒定後,用異硫代β-D-半乳糖昔(isopropyl β-D-thiogalactoside IPTG)誘導錶達融閤蛋白.經幾丁質親和層析柱純化.結果 化學閤成的抗菌肽SMAP-29衍生物對金黃色葡萄毬菌、大腸桿菌和綠膿桿菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的編碼基因按正確方嚮和序列插入錶達載體,融閤蛋白的錶達量達到大腸桿菌蛋白總量的40%,幾丁質親和層析後穫得瞭可溶性SMAP-29衍生物.結論 成功構建瞭以融閤蛋白形式錶達的抗菌肽SMAP-29衍生物大腸桿菌基因工程菌,剋服瞭抗菌肽對宿主菌的毒性,實現瞭用大腸桿菌高效錶達和一步親和層析純化,為進一步檢測活性及臨床應用奠定瞭基礎.
목적 이용대장간균표체계통표체구유항균활성적SMAP-29연생물,일보친화층석법진행순화.방법 화학합성경개조적항균태SMAP-29연생물,지편확산법검측항균활성후,인공병용합성항균태SMAP-29연생물기인서렬,극륭도표체재체pTYB11상,전화대장애희균BL-21(DE3),매절화측서감정후,용이류대β-D-반유당석(isopropyl β-D-thiogalactoside IPTG)유도표체융합단백.경궤정질친화층석주순화.결과 화학합성적항균태SMAP-29연생물대금황색포도구균、대장간균화록농간균구유일정적억균작용,SMAP-29연생물적편마기인안정학방향화서렬삽입표체재체,융합단백적표체량체도대장간균단백총량적40%,궤정질친화층석후획득료가용성SMAP-29연생물.결론 성공구건료이융합단백형식표체적항균태SMAP-29연생물대장간균기인공정균,극복료항균태대숙주균적독성,실현료용대장간균고효표체화일보친화층석순화,위진일보검측활성급림상응용전정료기출.
