生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2003年
5期
538-544
,共7页
陈建武%唐丽霞%宋少云%袁美妗%庞义
陳建武%唐麗霞%宋少雲%袁美妗%龐義
진건무%당려하%송소운%원미금%방의
苏云金杆菌%vip3A基因%克隆%表达
囌雲金桿菌%vip3A基因%剋隆%錶達
소운금간균%vip3A기인%극륭%표체
Vip3A蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在营养期分泌的一类新型杀虫蛋白.用PCR方法从114个Bt菌株和41个Bt标准菌株中筛选到39株即约25%的菌株含有vip3A基因.利用所制备的Vip3A蛋白的多克隆抗体对以上含有vip3A基因的Bt菌株进行Western印迹分析,发现多数PCR反应为阳性的菌株都产生89 kD大小的蛋白,其中有4株没有Vip3A蛋白的表达.从以上菌株中挑选2个对夜蛾科害虫具有较高和较低毒力的菌株,即S101和611,并分别进行vip3A基因的克隆和测序,再与GenBank上所登录的其它6个全长vip3A基因和2个已报道的但未登录GenBank的vip3A基因进行核苷酸和氨基酸序列比较,结果表明,vip3A是一个极其保守的基因.将以上所克隆的2个vip3A基因即vip3A-S101和 vip3A-611分别插入表达载体pQE30构建了表达质粒pOTP-S101和pOTP-611,转化到大肠杆菌M15,经1 mmol/L IPTG诱导后均表达89 kD大小的Vip3A蛋白.蛋白可溶性试验表明,Vip3A-S101和Vip3A-611分别有48%和35%的蛋白是可溶的.将Vip3A-S101和Vip3A-611蛋白和已报道的Vip3A-S184蛋白对初孵斜纹夜蛾 (Spodoptera litura) 幼虫进行生物测定,结果表明,3个Vip3A蛋白对斜纹夜蛾幼虫毒力没有显著性差异,这说明了Vip3A个别氨基酸的变化对蛋白的杀虫活性没有影响.
Vip3A蛋白是囌雲金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在營養期分泌的一類新型殺蟲蛋白.用PCR方法從114箇Bt菌株和41箇Bt標準菌株中篩選到39株即約25%的菌株含有vip3A基因.利用所製備的Vip3A蛋白的多剋隆抗體對以上含有vip3A基因的Bt菌株進行Western印跡分析,髮現多數PCR反應為暘性的菌株都產生89 kD大小的蛋白,其中有4株沒有Vip3A蛋白的錶達.從以上菌株中挑選2箇對夜蛾科害蟲具有較高和較低毒力的菌株,即S101和611,併分彆進行vip3A基因的剋隆和測序,再與GenBank上所登錄的其它6箇全長vip3A基因和2箇已報道的但未登錄GenBank的vip3A基因進行覈苷痠和氨基痠序列比較,結果錶明,vip3A是一箇極其保守的基因.將以上所剋隆的2箇vip3A基因即vip3A-S101和 vip3A-611分彆插入錶達載體pQE30構建瞭錶達質粒pOTP-S101和pOTP-611,轉化到大腸桿菌M15,經1 mmol/L IPTG誘導後均錶達89 kD大小的Vip3A蛋白.蛋白可溶性試驗錶明,Vip3A-S101和Vip3A-611分彆有48%和35%的蛋白是可溶的.將Vip3A-S101和Vip3A-611蛋白和已報道的Vip3A-S184蛋白對初孵斜紋夜蛾 (Spodoptera litura) 幼蟲進行生物測定,結果錶明,3箇Vip3A蛋白對斜紋夜蛾幼蟲毒力沒有顯著性差異,這說明瞭Vip3A箇彆氨基痠的變化對蛋白的殺蟲活性沒有影響.
Vip3A단백시소운금아포간균(Bacillus thuringiensis,Bt)재영양기분비적일류신형살충단백.용PCR방법종114개Bt균주화41개Bt표준균주중사선도39주즉약25%적균주함유vip3A기인.이용소제비적Vip3A단백적다극륭항체대이상함유vip3A기인적Bt균주진행Western인적분석,발현다수PCR반응위양성적균주도산생89 kD대소적단백,기중유4주몰유Vip3A단백적표체.종이상균주중도선2개대야아과해충구유교고화교저독력적균주,즉S101화611,병분별진행vip3A기인적극륭화측서,재여GenBank상소등록적기타6개전장vip3A기인화2개이보도적단미등록GenBank적vip3A기인진행핵감산화안기산서렬비교,결과표명,vip3A시일개겁기보수적기인.장이상소극륭적2개vip3A기인즉vip3A-S101화 vip3A-611분별삽입표체재체pQE30구건료표체질립pOTP-S101화pOTP-611,전화도대장간균M15,경1 mmol/L IPTG유도후균표체89 kD대소적Vip3A단백.단백가용성시험표명,Vip3A-S101화Vip3A-611분별유48%화35%적단백시가용적.장Vip3A-S101화Vip3A-611단백화이보도적Vip3A-S184단백대초부사문야아 (Spodoptera litura) 유충진행생물측정,결과표명,3개Vip3A단백대사문야아유충독력몰유현저성차이,저설명료Vip3A개별안기산적변화대단백적살충활성몰유영향.
