西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2005年
6期
1118-1125
,共8页
宋洪元%曹必好%丁建刚%雷建军%宋明
宋洪元%曹必好%丁建剛%雷建軍%宋明
송홍원%조필호%정건강%뢰건군%송명
barnase基因%克隆策略
barnase基因%剋隆策略
barnase기인%극륭책략
比较了目前报道的两种克隆barnase基因的方法--barnase基因的单独克隆和barstar抑制剂基因保护下的barnase基因克隆.分别利用4种质粒进行barnase基因的单独克隆时,得到的阳性克隆数量少.对其中15个阳性克隆进行了测序分析,结果有5个克隆出现碱基缺失,1个克隆出现碱基增加,其余9个克隆则出现氨基酸突变,均未得到氨基酸序列完全正确的克隆.进一步分析表明这些突变的位点大多直接与保持barnase蛋白的活性位点相关.而在克隆barnase基因之前,预先将barstar基因连同其自身启动子加载于待克隆载体上,随后再进行barnase基因克隆时则容易得到与报道的barnase基因序列完全一致的阳性克隆.分析认为由于barnase基因单独存在时有一定数量的蛋白表达,宿主菌大肠杆菌无法忍受而通过某种方式造成其barnase发生相应突变而无法实现barnase基因的单独克隆.因此有必要利用barstar基因的保护来进行barnase基因相应的克隆和遗传操作.
比較瞭目前報道的兩種剋隆barnase基因的方法--barnase基因的單獨剋隆和barstar抑製劑基因保護下的barnase基因剋隆.分彆利用4種質粒進行barnase基因的單獨剋隆時,得到的暘性剋隆數量少.對其中15箇暘性剋隆進行瞭測序分析,結果有5箇剋隆齣現堿基缺失,1箇剋隆齣現堿基增加,其餘9箇剋隆則齣現氨基痠突變,均未得到氨基痠序列完全正確的剋隆.進一步分析錶明這些突變的位點大多直接與保持barnase蛋白的活性位點相關.而在剋隆barnase基因之前,預先將barstar基因連同其自身啟動子加載于待剋隆載體上,隨後再進行barnase基因剋隆時則容易得到與報道的barnase基因序列完全一緻的暘性剋隆.分析認為由于barnase基因單獨存在時有一定數量的蛋白錶達,宿主菌大腸桿菌無法忍受而通過某種方式造成其barnase髮生相應突變而無法實現barnase基因的單獨剋隆.因此有必要利用barstar基因的保護來進行barnase基因相應的剋隆和遺傳操作.
비교료목전보도적량충극륭barnase기인적방법--barnase기인적단독극륭화barstar억제제기인보호하적barnase기인극륭.분별이용4충질립진행barnase기인적단독극륭시,득도적양성극륭수량소.대기중15개양성극륭진행료측서분석,결과유5개극륭출현감기결실,1개극륭출현감기증가,기여9개극륭칙출현안기산돌변,균미득도안기산서렬완전정학적극륭.진일보분석표명저사돌변적위점대다직접여보지barnase단백적활성위점상관.이재극륭barnase기인지전,예선장barstar기인련동기자신계동자가재우대극륭재체상,수후재진행barnase기인극륭시칙용역득도여보도적barnase기인서렬완전일치적양성극륭.분석인위유우barnase기인단독존재시유일정수량적단백표체,숙주균대장간균무법인수이통과모충방식조성기barnase발생상응돌변이무법실현barnase기인적단독극륭.인차유필요이용barstar기인적보호래진행barnase기인상응적극륭화유전조작.
