环境科学研究
環境科學研究
배경과학연구
RSEARCH OF ENUIRONMENTAL SCIENCES
2007年
3期
137-141
,共5页
张崇淼%刘永军%王晓昌%薛小平
張崇淼%劉永軍%王曉昌%薛小平
장숭묘%류영군%왕효창%설소평
肠道病毒%逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)%通用引物%同时检测%水
腸道病毒%逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)%通用引物%同時檢測%水
장도병독%역전록-취합매련반응(RT-PCR)%통용인물%동시검측%수
建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1～3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成功地从地表水和生活污水中逆转录病毒RNA,更适于实际应用.对比研究了PCR过程中的退火温度,c(Mg2+)等因素对RT-PCR检测结果的影响,选择退火温度55 ℃,c(Mg2+)为2 mmol/L的反应条件,优化了RT-PCR检测方法.通过检测水样中接种的连续稀释的病毒,确定了该检测方法的灵敏度为38 CCID50.考察人工污染的地表水、污水、二级处理出水样品发现,检测灵敏度基本一致.该方法可应用在实际环境的肠道病毒检测中.
建立瞭一種利用通用引物RT-PCR技術檢測水中腸道病毒的方法.利用脊髓灰質炎病毒1～3型,柯薩奇病毒B3型作為參攷病毒株,根據腸道病毒RNA5′非編碼區中具有高度同源性的序列來設計通用引物.比較瞭M-MLV酶和AMV酶的逆轉錄效果,AMV酶能夠成功地從地錶水和生活汙水中逆轉錄病毒RNA,更適于實際應用.對比研究瞭PCR過程中的退火溫度,c(Mg2+)等因素對RT-PCR檢測結果的影響,選擇退火溫度55 ℃,c(Mg2+)為2 mmol/L的反應條件,優化瞭RT-PCR檢測方法.通過檢測水樣中接種的連續稀釋的病毒,確定瞭該檢測方法的靈敏度為38 CCID50.攷察人工汙染的地錶水、汙水、二級處理齣水樣品髮現,檢測靈敏度基本一緻.該方法可應用在實際環境的腸道病毒檢測中.
건립료일충이용통용인물RT-PCR기술검측수중장도병독적방법.이용척수회질염병독1～3형,가살기병독B3형작위삼고병독주,근거장도병독RNA5′비편마구중구유고도동원성적서렬래설계통용인물.비교료M-MLV매화AMV매적역전록효과,AMV매능구성공지종지표수화생활오수중역전록병독RNA,경괄우실제응용.대비연구료PCR과정중적퇴화온도,c(Mg2+)등인소대RT-PCR검측결과적영향,선택퇴화온도55 ℃,c(Mg2+)위2 mmol/L적반응조건,우화료RT-PCR검측방법.통과검측수양중접충적련속희석적병독,학정료해검측방법적령민도위38 CCID50.고찰인공오염적지표수、오수、이급처리출수양품발현,검측령민도기본일치.해방법가응용재실제배경적장도병독검측중.
