CAJ | 학술논문

为获得牛生长激素(BST)蛋白,构建了工程菌并进行了诱导表达.先设计2对引物,从pUCm-T-BST克隆中扩增出BST成熟蛋白编码序列,双酶切后分别插入表达载体(pET30a和pET29a),转化E.coli DH5α并进行阳性克隆鉴定;再将重组质粒分别转化到E.coli BL21(DE3)和RosettaTM(DE3)pLysS中,构建BST原核工程菌;最后进行诱导表达.结果表明,重组表达载体pET30a-BST和pET29a-BST中均插入了正确的目的基因;经IPTG诱导后,以BL21(DE3)为宿主的工程菌无目的蛋白表达,而pET30a-BST/RosettaTM和pET29a-BST/RosettaTM分别可见分子量约29.5,26.5 kD的融合蛋白表达,约占菌体蛋白的26%,35%.说明稀有密码子限制BST基因在E.coli中的表达,选择适宜的宿主菌可克服此障碍.
위획득우생장격소(BST)단백,구건료공정균병진행료유도표체.선설계2대인물,종pUCm-T-BST극륭중확증출BST성숙단백편마서렬,쌍매절후분별삽입표체재체(pET30a화pET29a),전화E.coli DH5α병진행양성극륭감정;재장중조질립분별전화도E.coli BL21(DE3)화RosettaTM(DE3)pLysS중,구건BST원핵공정균;최후진행유도표체.결과표명,중조표체재체pET30a-BST화pET29a-BST중균삽입료정학적목적기인;경IPTG유도후,이BL21(DE3)위숙주적공정균무목적단백표체,이pET30a-BST/RosettaTM화pET29a-BST/RosettaTM분별가견분자량약29.5,26.5 kD적융합단백표체,약점균체단백적26%,35%.설명희유밀마자한제BST기인재E.coli중적표체,선택괄의적숙주균가극복차장애.