南通大学学报（医学版）
南通大學學報（醫學版）
남통대학학보（의학판）
JOURNAL OF NANTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2011年
2期
83-86
,共4页
沈双%王凤鸣%王婷%陈礼文%於葛华%张学光
瀋雙%王鳳鳴%王婷%陳禮文%於葛華%張學光
침쌍%왕봉명%왕정%진례문%어갈화%장학광
GL50%转基因细胞%T细胞
GL50%轉基因細胞%T細胞
GL50%전기인세포%T세포
目的:建立稳定表达人协同刺激分子GL50的转基因细胞,探讨其体外对T细胞活化与增殖的协同刺激效应.方法:RT-PCR法从人B淋巴瘤Daudi细胞中克隆人GL50编码区全长基因,经EcoR I和BamH I双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体,构建pIRES2-EGFP-GL50重组子.用脂质体法转染小鼠成纤维L929细胞株,经G418长期加压筛选,免疫荧光标记和流式细胞术分析GL50分子在L929/GL50细胞膜上的表达,CCK-8法和酶联免疫吸附测定法(ELISA)分析L929/GL50转基因细胞对T淋巴细胞体外增殖与活化的影响.结果:成功建立稳定表达GL50分子的L929/GL50转基因细胞.该转基因细胞在体外能显著地促进T细胞增殖;促进T细胞的活化及其对IL-4、IL-10和IL-17等细胞因子的分泌.结论:ICOS/GL50信号在机体免疫应答过程中发挥了重要作用,GL50转基因细胞的成功构建为进一步研究ICOS/GL50分子的生物学功能奠定了物质基础.
目的:建立穩定錶達人協同刺激分子GL50的轉基因細胞,探討其體外對T細胞活化與增殖的協同刺激效應.方法:RT-PCR法從人B淋巴瘤Daudi細胞中剋隆人GL50編碼區全長基因,經EcoR I和BamH I雙酶切後插入pIRES2-EGFP真覈錶達載體,構建pIRES2-EGFP-GL50重組子.用脂質體法轉染小鼠成纖維L929細胞株,經G418長期加壓篩選,免疫熒光標記和流式細胞術分析GL50分子在L929/GL50細胞膜上的錶達,CCK-8法和酶聯免疫吸附測定法(ELISA)分析L929/GL50轉基因細胞對T淋巴細胞體外增殖與活化的影響.結果:成功建立穩定錶達GL50分子的L929/GL50轉基因細胞.該轉基因細胞在體外能顯著地促進T細胞增殖;促進T細胞的活化及其對IL-4、IL-10和IL-17等細胞因子的分泌.結論:ICOS/GL50信號在機體免疫應答過程中髮揮瞭重要作用,GL50轉基因細胞的成功構建為進一步研究ICOS/GL50分子的生物學功能奠定瞭物質基礎.
목적:건립은정표체인협동자격분자GL50적전기인세포,탐토기체외대T세포활화여증식적협동자격효응.방법:RT-PCR법종인B림파류Daudi세포중극륭인GL50편마구전장기인,경EcoR I화BamH I쌍매절후삽입pIRES2-EGFP진핵표체재체,구건pIRES2-EGFP-GL50중조자.용지질체법전염소서성섬유L929세포주,경G418장기가압사선,면역형광표기화류식세포술분석GL50분자재L929/GL50세포막상적표체,CCK-8법화매련면역흡부측정법(ELISA)분석L929/GL50전기인세포대T림파세포체외증식여활화적영향.결과:성공건립은정표체GL50분자적L929/GL50전기인세포.해전기인세포재체외능현저지촉진T세포증식;촉진T세포적활화급기대IL-4、IL-10화IL-17등세포인자적분비.결론:ICOS/GL50신호재궤체면역응답과정중발휘료중요작용,GL50전기인세포적성공구건위진일보연구ICOS/GL50분자적생물학공능전정료물질기출.
