山西医药杂志
山西醫藥雜誌
산서의약잡지
SHANXI MEDICAL JOURNAL
2011年
2期
107-110
,共4页
王璇%任娟%张伯翔%于涛%蓝茜%李玥%吕社民%李冬民
王璇%任娟%張伯翔%于濤%藍茜%李玥%呂社民%李鼕民
왕선%임연%장백상%우도%람천%리모%려사민%리동민
组蛋白脱乙酰基酶类%真核表达载体pEGFP-N1%基因表达%重组质粒
組蛋白脫乙酰基酶類%真覈錶達載體pEGFP-N1%基因錶達%重組質粒
조단백탈을선기매류%진핵표체재체pEGFP-N1%기인표체%중조질립
目的 利用pEGFP-N1真核表达载体构建组蛋白去乙酰化酶3真核表达载体pEGFP-Hdac3,并鉴定其在大鼠肝癌细胞系CBRH-7919中的表达.方法 利用大鼠肝脏cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)获取目的 基因Hdac3;用HindⅢ、BamH I双酶切真核表达载体pEGFP-N1和目的 基因Hdac3,用T4 DNA连接酶连接纯化后的酶切产物;连接产物转化DH5α大肠杆菌感受态细胞并挑选阳性克隆,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒.利用测序正确的重组体转染CBRH-7919细胞,检测Hdac3和PPAR-γ的mRNA表达.结果 利用基因克隆技术获得组蛋白去乙酰化酶3的真核表达载体pEGFP-Hdac3重组质粒.PCR,双酶切,DNA测序证实目的 基因Hdac3已成功插入pEGFP载体中.用重组质粒转染大鼠肝癌细胞系CBRH-7919后Hdac3 mRNA表达显著升高、而PPAR-γ mRNA表达明显降低.结论 本研究成功构建了蛋白去乙酰化酶3的真核表达载体pEGFP-Hdac3.
目的 利用pEGFP-N1真覈錶達載體構建組蛋白去乙酰化酶3真覈錶達載體pEGFP-Hdac3,併鑒定其在大鼠肝癌細胞繫CBRH-7919中的錶達.方法 利用大鼠肝髒cDNA為模闆,聚閤酶鏈反應(PCR)穫取目的 基因Hdac3;用HindⅢ、BamH I雙酶切真覈錶達載體pEGFP-N1和目的 基因Hdac3,用T4 DNA連接酶連接純化後的酶切產物;連接產物轉化DH5α大腸桿菌感受態細胞併挑選暘性剋隆,併通過PCR、雙酶切、DNA測序鑒定構建的重組質粒.利用測序正確的重組體轉染CBRH-7919細胞,檢測Hdac3和PPAR-γ的mRNA錶達.結果 利用基因剋隆技術穫得組蛋白去乙酰化酶3的真覈錶達載體pEGFP-Hdac3重組質粒.PCR,雙酶切,DNA測序證實目的 基因Hdac3已成功插入pEGFP載體中.用重組質粒轉染大鼠肝癌細胞繫CBRH-7919後Hdac3 mRNA錶達顯著升高、而PPAR-γ mRNA錶達明顯降低.結論 本研究成功構建瞭蛋白去乙酰化酶3的真覈錶達載體pEGFP-Hdac3.
목적 이용pEGFP-N1진핵표체재체구건조단백거을선화매3진핵표체재체pEGFP-Hdac3,병감정기재대서간암세포계CBRH-7919중적표체.방법 이용대서간장cDNA위모판,취합매련반응(PCR)획취목적 기인Hdac3;용HindⅢ、BamH I쌍매절진핵표체재체pEGFP-N1화목적 기인Hdac3,용T4 DNA련접매련접순화후적매절산물;련접산물전화DH5α대장간균감수태세포병도선양성극륭,병통과PCR、쌍매절、DNA측서감정구건적중조질립.이용측서정학적중조체전염CBRH-7919세포,검측Hdac3화PPAR-γ적mRNA표체.결과 이용기인극륭기술획득조단백거을선화매3적진핵표체재체pEGFP-Hdac3중조질립.PCR,쌍매절,DNA측서증실목적 기인Hdac3이성공삽입pEGFP재체중.용중조질립전염대서간암세포계CBRH-7919후Hdac3 mRNA표체현저승고、이PPAR-γ mRNA표체명현강저.결론 본연구성공구건료단백거을선화매3적진핵표체재체pEGFP-Hdac3.
