解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2012年
3期
205-207,211
,共4页
CD146%蛋白质印迹%融合蛋白%免疫荧光%胃癌
CD146%蛋白質印跡%融閤蛋白%免疫熒光%胃癌
CD146%단백질인적%융합단백%면역형광%위암
目的 构建CD146原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达和定位.方法 提取人黑色素瘤细胞A875的总mRNA并进行反转.以反转录的cDNA为模板PCR扩增CD146全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-myc/his以及pGEX-4T-3表达载体中.原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经了诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌MKN45细胞中,分别利用western blot和激光共焦扫描显微技术检测了重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位.结果 CD146全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为1930 bp.原核诱导出了GST-CD 146并进行了纯化,CD146在真核细胞中表达为113KD的糖蛋白,Western blot检测到真核转染的myc/his-CD146表达,条带约为120KD,免疫荧光显示蛋白定位在胃癌MKN细胞膜.结论 成功构建了CD146原核、真核表达载体,融合蛋白在胃癌MKN45细胞表达.
目的 構建CD146原覈、真覈錶達載體,證實融閤蛋白在原覈細胞的誘導錶達以及在胃癌細胞內的錶達和定位.方法 提取人黑色素瘤細胞A875的總mRNA併進行反轉.以反轉錄的cDNA為模闆PCR擴增CD146全長編碼基因,分彆剋隆至pCDNA3.1-myc/his以及pGEX-4T-3錶達載體中.原覈重組質粒鑒定後轉入BL21細胞中併經瞭誘導錶達及純化,真覈錶達質粒轉入胃癌MKN45細胞中,分彆利用western blot和激光共焦掃描顯微技術檢測瞭重組質粒的錶達以及在胃癌細胞中的定位.結果 CD146全長基因序列剋隆到原覈、真覈錶達載體中,酶切鑒定片段為1930 bp.原覈誘導齣瞭GST-CD 146併進行瞭純化,CD146在真覈細胞中錶達為113KD的糖蛋白,Western blot檢測到真覈轉染的myc/his-CD146錶達,條帶約為120KD,免疫熒光顯示蛋白定位在胃癌MKN細胞膜.結論 成功構建瞭CD146原覈、真覈錶達載體,融閤蛋白在胃癌MKN45細胞錶達.
목적 구건CD146원핵、진핵표체재체,증실융합단백재원핵세포적유도표체이급재위암세포내적표체화정위.방법 제취인흑색소류세포A875적총mRNA병진행반전.이반전록적cDNA위모판PCR확증CD146전장편마기인,분별극륭지pCDNA3.1-myc/his이급pGEX-4T-3표체재체중.원핵중조질립감정후전입BL21세포중병경료유도표체급순화,진핵표체질립전입위암MKN45세포중,분별이용western blot화격광공초소묘현미기술검측료중조질립적표체이급재위암세포중적정위.결과 CD146전장기인서렬극륭도원핵、진핵표체재체중,매절감정편단위1930 bp.원핵유도출료GST-CD 146병진행료순화,CD146재진핵세포중표체위113KD적당단백,Western blot검측도진핵전염적myc/his-CD146표체,조대약위120KD,면역형광현시단백정위재위암MKN세포막.결론 성공구건료CD146원핵、진핵표체재체,융합단백재위암MKN45세포표체.
