病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2003年
4期
342-347
,共6页
杜恩岐%刘胜旺%孔宪刚%童光志%杨增岐
杜恩岐%劉勝旺%孔憲剛%童光誌%楊增岐
두은기%류성왕%공헌강%동광지%양증기
传染性支气管炎病毒%重组核蛋白%多克隆抗体%抗原性
傳染性支氣管炎病毒%重組覈蛋白%多剋隆抗體%抗原性
전염성지기관염병독%중조핵단백%다극륭항체%항원성
为了研究重组鸡传染性支气管炎病毒核蛋白能否作为群特异性诊断抗原加以应用,将鸡传染性支气管炎病毒国内分离株IBV-LX4核蛋白基因亚克隆于大肠杆菌原核表达载体pPROEXTMHT中,构建拟表达重组鸡传染性支气管炎病毒核蛋白的重组质粒pPROEXTMHT-N.经核苷酸序列测定后,阳性质粒转化大肠杆菌DH5α,并进行诱导表达.表达产物经SD S-PAGE、Western blot鉴定,表明核蛋白在大肠杆菌中获得了表达,表达产物是分子量分别为约56kD和45kD的蛋白,其中分子量为56kD的蛋白表达量约为菌体总蛋白的13%.包涵体被6mol盐酸胍裂解后,通过镍离子亲和树脂进行了纯化,并用纯化的分子量为56kD的重组蛋白免疫新西兰白兔,所获得的兔抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白多克隆抗体,分别与不同致病型的鸡传染性支气管炎病毒进行琼脂扩散反应,结果表明 ,该多克隆抗体可与各不同致病型毒株发生反应.这初步表明重组鸡传染性支气管炎病毒核蛋白,可作为群特异性诊断抗原用于该病毒的诊断中.
為瞭研究重組鷄傳染性支氣管炎病毒覈蛋白能否作為群特異性診斷抗原加以應用,將鷄傳染性支氣管炎病毒國內分離株IBV-LX4覈蛋白基因亞剋隆于大腸桿菌原覈錶達載體pPROEXTMHT中,構建擬錶達重組鷄傳染性支氣管炎病毒覈蛋白的重組質粒pPROEXTMHT-N.經覈苷痠序列測定後,暘性質粒轉化大腸桿菌DH5α,併進行誘導錶達.錶達產物經SD S-PAGE、Western blot鑒定,錶明覈蛋白在大腸桿菌中穫得瞭錶達,錶達產物是分子量分彆為約56kD和45kD的蛋白,其中分子量為56kD的蛋白錶達量約為菌體總蛋白的13%.包涵體被6mol鹽痠胍裂解後,通過鎳離子親和樹脂進行瞭純化,併用純化的分子量為56kD的重組蛋白免疫新西蘭白兔,所穫得的兔抗鷄傳染性支氣管炎病毒覈蛋白多剋隆抗體,分彆與不同緻病型的鷄傳染性支氣管炎病毒進行瓊脂擴散反應,結果錶明 ,該多剋隆抗體可與各不同緻病型毒株髮生反應.這初步錶明重組鷄傳染性支氣管炎病毒覈蛋白,可作為群特異性診斷抗原用于該病毒的診斷中.
위료연구중조계전염성지기관염병독핵단백능부작위군특이성진단항원가이응용,장계전염성지기관염병독국내분리주IBV-LX4핵단백기인아극륭우대장간균원핵표체재체pPROEXTMHT중,구건의표체중조계전염성지기관염병독핵단백적중조질립pPROEXTMHT-N.경핵감산서렬측정후,양성질립전화대장간균DH5α,병진행유도표체.표체산물경SD S-PAGE、Western blot감정,표명핵단백재대장간균중획득료표체,표체산물시분자량분별위약56kD화45kD적단백,기중분자량위56kD적단백표체량약위균체총단백적13%.포함체피6mol염산고렬해후,통과얼리자친화수지진행료순화,병용순화적분자량위56kD적중조단백면역신서란백토,소획득적토항계전염성지기관염병독핵단백다극륭항체,분별여불동치병형적계전염성지기관염병독진행경지확산반응,결과표명 ,해다극륭항체가여각불동치병형독주발생반응.저초보표명중조계전염성지기관염병독핵단백,가작위군특이성진단항원용우해병독적진단중.
