CAJ | 학술논문

在掌握小鼠ICSI技术的基础上,进行了ICSI技术生产转基因小鼠的研究.来自成年KM小鼠附睾尾的精子,使用未加抗冻剂的HEPES-CZB溶液,在液氮中冻融1次后,用于本实验.解冻精子与DNA混匀1 min后,精子头被显微注射到B6D2F1小鼠成熟卵母细胞质中.精子头与pEGFP-N1环状DNA共注射生产的ICSI受精卵,在CZB溶液中培养至囊胚期时,39.1%(9/23)的囊胚表达GFP基因.精子注射后6h,直接移植ICSI受精卵后,7只妊娠受体一共产仔30只,效率为23.8%(30/126).Southern blot分析其中16只小鼠发现,3只(18.8%)转基因小鼠同时整合了GFP和Neomycin基因,它们全部来自精子和线性DNA混合的实验组(阳性效率为33.3%,3/9),相反,精子与环状质粒DNA共注射生产的7只ICSI后代中,没有检测到外源基因.转基因小鼠整合的外源基因能够传递给它们后代.结果说明,利用ICSI技术可以高效地生产转基因小鼠,宿主基因组可能更容易整合线性化的外源基因.
재장악소서ICSI기술적기출상,진행료ICSI기술생산전기인소서적연구.래자성년KM소서부고미적정자,사용미가항동제적HEPES-CZB용액,재액담중동융1차후,용우본실험.해동정자여DNA혼균1 min후,정자두피현미주사도B6D2F1소서성숙란모세포질중.정자두여pEGFP-N1배상DNA공주사생산적ICSI수정란,재CZB용액중배양지낭배기시,39.1%(9/23)적낭배표체GFP기인.정자주사후6h,직접이식ICSI수정란후,7지임신수체일공산자30지,효솔위23.8%(30/126).Southern blot분석기중16지소서발현,3지(18.8%)전기인소서동시정합료GFP화Neomycin기인,타문전부래자정자화선성DNA혼합적실험조(양성효솔위33.3%,3/9),상반,정자여배상질립DNA공주사생산적7지ICSI후대중,몰유검측도외원기인.전기인소서정합적외원기인능구전체급타문후대.결과설명,이용ICSI기술가이고효지생산전기인소서,숙주기인조가능경용역정합선성화적외원기인.