CAJ | 학술논문

背景:原代培养的人正常胃黏膜上皮细胞与体内姊妹细胞相似,是进行胃生理和病理研究的理想工具,但我国尚未见简便、可靠的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法的报道.目的:探讨简便的人正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法.方法:以胶原酶Ⅱ和分散酶磁性搅拌分离人正常胃黏膜上皮细胞.以甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测细胞活力,以观察细胞大体生长过程;以溴脱氧尿苷(BrdU)标记法检测S期细胞数量,以观察细胞微观增殖能力.以PAS染色鉴定胃黏膜上皮细胞黏原颗粒;以细胞角蛋白(CK)-18免疫荧光染色鉴定上皮细胞.以光学显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态结构.初步观察传代细胞的贴壁生长情况.结果:培养第2～3 d,胃黏膜上皮细胞活力增幅最大,第4 d达最高点,之后逐渐下降;BrdU孵育18 h后,33.3%的细胞处于和曾经处于S期.接种密度高时,细胞PAS染色均呈紫红色,可见细胞核旁黏原颗粒;接种密度低时,仅成团细胞PAS染色呈阳性;培养第3 d,绝大部分细胞CK-18阳性.接种第2 d,胃黏膜上皮细胞成团簇状生长,增殖迅速,第4 d后逐渐停止生长,第5 d开始出现漂浮死亡细胞,最终完全被成纤维细胞取代;透射电子显微镜可见微绒毛、分泌颗粒、连接复合体等上皮细胞特征.传代胃黏膜上皮细胞增殖、铺展能力较原代细胞降低.结论:磁性搅拌酶分离培养可得到数量多、纯度高的人正常胃黏膜上皮细胞.
배경:원대배양적인정상위점막상피세포여체내자매세포상사,시진행위생리화병리연구적이상공구,단아국상미견간편、가고적인정상위점막상피세포원대배양방법적보도.목적:탐토간편적인정상위점막상피세포원대배양방법.방법:이효원매Ⅱ화분산매자성교반분리인정상위점막상피세포.이갑기새서기사서(MTT)비색법검측세포활력,이관찰세포대체생장과정;이추탈양뇨감(BrdU)표기법검측S기세포수량,이관찰세포미관증식능력.이PAS염색감정위점막상피세포점원과립;이세포각단백(CK)-18면역형광염색감정상피세포.이광학현미경화투사전자현미경관찰세포형태결구.초보관찰전대세포적첩벽생장정황.결과:배양제2～3 d,위점막상피세포활력증폭최대,제4 d체최고점,지후축점하강;BrdU부육18 h후,33.3%적세포처우화증경처우S기.접충밀도고시,세포PAS염색균정자홍색,가견세포핵방점원과립;접충밀도저시,부성단세포PAS염색정양성;배양제3 d,절대부분세포CK-18양성.접충제2 d,위점막상피세포성단족상생장,증식신속,제4 d후축점정지생장,제5 d개시출현표부사망세포,최종완전피성섬유세포취대;투사전자현미경가견미융모、분비과립、련접복합체등상피세포특정.전대위점막상피세포증식、포전능력교원대세포강저.결론:자성교반매분리배양가득도수량다、순도고적인정상위점막상피세포.