中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
2期
19-23
,共5页
宋现让%迟伟玲%魏玲%王兴武%柳永蕾%宋宝
宋現讓%遲偉玲%魏玲%王興武%柳永蕾%宋寶
송현양%지위령%위령%왕흥무%류영뢰%송보
乏氧诱导因子-1α%慢病毒载体%RNA干扰%整合
乏氧誘導因子-1α%慢病毒載體%RNA榦擾%整閤
핍양유도인자-1α%만병독재체%RNA간우%정합
目的:探讨慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰的影响因素.方法:用介导RNAi的慢病毒载体Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β分别转导人肿瘤细胞系Hela、SPCA1和A549,筛选靶基因稳定表达沉默的细胞株.病毒RNA分子拷贝数和靶基因mRNA水平用实时定量RT-PCR确定.结果:针对不同靶基因的慢病毒转导肿瘤细胞的效率与靶基因无关、存在细胞类型特异性.8h内病毒转导效率与吸附时间呈正关,12h后继续延长吸附时间不能提高转导效率.对靶基因表达的特异性抑制效果与病毒量呈正相关.靶基因稳定沉默细胞株的RNAi效果与细胞类型无关,与靶细胞基因组整合的shRNA表达结构的拷贝数呈正相关.结论:慢病毒载体介导人肿瘤细胞RNA干扰,短期基因抑制效果取决于细胞类型、病毒量和病毒的吸附时间,稳定基因沉默效果与病毒整合到靶细胞基因组的拷贝数相关,筛选稳定基因沉默细胞株时,应尽可能提高病毒量以提高病毒整合的拷贝数.
目的:探討慢病毒載體介導人腫瘤細胞RNA榦擾的影響因素.方法:用介導RNAi的慢病毒載體Lenti6-HIF1α和Lenti6-HIF1β分彆轉導人腫瘤細胞繫Hela、SPCA1和A549,篩選靶基因穩定錶達沉默的細胞株.病毒RNA分子拷貝數和靶基因mRNA水平用實時定量RT-PCR確定.結果:針對不同靶基因的慢病毒轉導腫瘤細胞的效率與靶基因無關、存在細胞類型特異性.8h內病毒轉導效率與吸附時間呈正關,12h後繼續延長吸附時間不能提高轉導效率.對靶基因錶達的特異性抑製效果與病毒量呈正相關.靶基因穩定沉默細胞株的RNAi效果與細胞類型無關,與靶細胞基因組整閤的shRNA錶達結構的拷貝數呈正相關.結論:慢病毒載體介導人腫瘤細胞RNA榦擾,短期基因抑製效果取決于細胞類型、病毒量和病毒的吸附時間,穩定基因沉默效果與病毒整閤到靶細胞基因組的拷貝數相關,篩選穩定基因沉默細胞株時,應儘可能提高病毒量以提高病毒整閤的拷貝數.
목적:탐토만병독재체개도인종류세포RNA간우적영향인소.방법:용개도RNAi적만병독재체Lenti6-HIF1α화Lenti6-HIF1β분별전도인종류세포계Hela、SPCA1화A549,사선파기인은정표체침묵적세포주.병독RNA분자고패수화파기인mRNA수평용실시정량RT-PCR학정.결과:침대불동파기인적만병독전도종류세포적효솔여파기인무관、존재세포류형특이성.8h내병독전도효솔여흡부시간정정관,12h후계속연장흡부시간불능제고전도효솔.대파기인표체적특이성억제효과여병독량정정상관.파기인은정침묵세포주적RNAi효과여세포류형무관,여파세포기인조정합적shRNA표체결구적고패수정정상관.결론:만병독재체개도인종류세포RNA간우,단기기인억제효과취결우세포류형、병독량화병독적흡부시간,은정기인침묵효과여병독정합도파세포기인조적고패수상관,사선은정기인침묵세포주시,응진가능제고병독량이제고병독정합적고패수.
