生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
3期
1-4
,共4页
何秋璟%张春龙%仁哲%张美英%朱钦昌%刘秋英%张佩琢%王一飞
何鞦璟%張春龍%仁哲%張美英%硃欽昌%劉鞦英%張珮琢%王一飛
하추경%장춘룡%인철%장미영%주흠창%류추영%장패탁%왕일비
UL30基因/单纯疱疹病毒1型%分子克隆%EGFP%融合表达载体
UL30基因/單純皰疹病毒1型%分子剋隆%EGFP%融閤錶達載體
UL30기인/단순포진병독1형%분자극륭%EGFP%융합표체재체
目的:克隆HSV-1 U130 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础.方法:从感染HSV-1 F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA 4个小片段亚克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表达质粒,转染VERO细胞,荧光显微镜观察融合蛋白表达情况.结果:成功克隆出UL30 cDNA,序列对比显示与基因库中的HSV-1 F株UL30序列同源性为99.4%;成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体并实现Fi-EGFP融合蛋白的表达.结论:成功克隆出UL30 cDNA,成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础.
目的:剋隆HSV-1 U130 cDNA併測序,構建pEGFP-N1-Fi融閤錶達載體,為靶嚮UL30基因的siRNA的設計和篩選奠定基礎.方法:從感染HSV-1 F株的病變VERO細胞提取總RNA,二次PCR擴增齣UL30 cDNA併剋隆至pEGFP-N1質粒,測序鑒定序列;將UL30 cDNA 4箇小片段亞剋隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融閤錶達質粒,轉染VERO細胞,熒光顯微鏡觀察融閤蛋白錶達情況.結果:成功剋隆齣UL30 cDNA,序列對比顯示與基因庫中的HSV-1 F株UL30序列同源性為99.4%;成功構建pEGFP-N1-Fi融閤錶達載體併實現Fi-EGFP融閤蛋白的錶達.結論:成功剋隆齣UL30 cDNA,成功構建pEGFP-N1-Fi融閤錶達載體,為靶嚮UL30基因的siRNA的設計和篩選奠定基礎.
목적:극륭HSV-1 U130 cDNA병측서,구건pEGFP-N1-Fi융합표체재체,위파향UL30기인적siRNA적설계화사선전정기출.방법:종감염HSV-1 F주적병변VERO세포제취총RNA,이차PCR확증출UL30 cDNA병극륭지pEGFP-N1질립,측서감정서렬;장UL30 cDNA 4개소편단아극륭지pEGFP-N1형성pEGFP-N1-Fi융합표체질립,전염VERO세포,형광현미경관찰융합단백표체정황.결과:성공극륭출UL30 cDNA,서렬대비현시여기인고중적HSV-1 F주UL30서렬동원성위99.4%;성공구건pEGFP-N1-Fi융합표체재체병실현Fi-EGFP융합단백적표체.결론:성공극륭출UL30 cDNA,성공구건pEGFP-N1-Fi융합표체재체,위파향UL30기인적siRNA적설계화사선전정기출.
