暨南大学学报(自然科学与医学版)
暨南大學學報(自然科學與醫學版)
기남대학학보(자연과학여의학판)
JOURNAL OF JINAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
4期
381-384,395
,共5页
陈炫%汤绍辉%唐晖%查庆兵%刘芳
陳炫%湯紹輝%唐暉%查慶兵%劉芳
진현%탕소휘%당휘%사경병%류방
铜绿假单胞菌%SOS反应%阻遏蛋白(LexA)%结合位点
銅綠假單胞菌%SOS反應%阻遏蛋白(LexA)%結閤位點
동록가단포균%SOS반응%조알단백(LexA)%결합위점
目的:分析铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginoso,,PA)的LesA与其靶位点的特异性结合的特性.方法:以PCR法扩增PA的LexA基因,将其克隆于原核表达载体pET-22b(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用镍离子亲合柱层析和Superdex-75凝胶过滤层析分离和纯化目的蛋白,以含推定LexA结合位点的片段CTGTN27ACAG为探针,用凝胶阻滞试验检测LexA蛋白与探针序列结合的能力及特异性.结果:构建了pET22b-LexA重组质粒,IPTG诱导目的蛋白表达率约为25%,获得纯度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能与LexA蛋白发生特异性结合.结论:推定Lex4结合位点CTGTN27ACAG能与PA的LexA蛋白特异性结合,可能是LexA蛋白的结合靶位点.
目的:分析銅綠假單胞菌(pseudomonas aeruginoso,,PA)的LesA與其靶位點的特異性結閤的特性.方法:以PCR法擴增PA的LexA基因,將其剋隆于原覈錶達載體pET-22b(+),轉化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導錶達,採用鎳離子親閤柱層析和Superdex-75凝膠過濾層析分離和純化目的蛋白,以含推定LexA結閤位點的片段CTGTN27ACAG為探針,用凝膠阻滯試驗檢測LexA蛋白與探針序列結閤的能力及特異性.結果:構建瞭pET22b-LexA重組質粒,IPTG誘導目的蛋白錶達率約為25%,穫得純度大于95%的目的蛋白;CTGTN27ACAG能與LexA蛋白髮生特異性結閤.結論:推定Lex4結閤位點CTGTN27ACAG能與PA的LexA蛋白特異性結閤,可能是LexA蛋白的結閤靶位點.
목적:분석동록가단포균(pseudomonas aeruginoso,,PA)적LesA여기파위점적특이성결합적특성.방법:이PCR법확증PA적LexA기인,장기극륭우원핵표체재체pET-22b(+),전화대장애희균BL21(DE3),IPTG유도표체,채용얼리자친합주층석화Superdex-75응효과려층석분리화순화목적단백,이함추정LexA결합위점적편단CTGTN27ACAG위탐침,용응효조체시험검측LexA단백여탐침서렬결합적능력급특이성.결과:구건료pET22b-LexA중조질립,IPTG유도목적단백표체솔약위25%,획득순도대우95%적목적단백;CTGTN27ACAG능여LexA단백발생특이성결합.결론:추정Lex4결합위점CTGTN27ACAG능여PA적LexA단백특이성결합,가능시LexA단백적결합파위점.
