CAJ | 학술논문

目的构建并筛选Smoothened(SMO)基因的RNAi表达质粒,了解Hedgehog信号通路影响乳腺癌细胞增殖的作用机制.方法以脂质体LipofectaminemTM 2000介导转染乳腺癌MCF-7细胞.转染后48 h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中SMO基因mRNA的转录水平,筛选有效的SMO RNAi质粒,Western blot检测SMO蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测SMO短发夹状RNA(shRNA)对cyclinD1 mRNA表达的影响.结果 4个SMO shRNA表达载体SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3和SMO shRNA-4经测序鉴定证明插入正确.转染48 h后,与MOCK组相比,SMO shRNA-1、SMOshRNA-3、SMO shRNA-4组SMO mRNA表达量均下降(P=0.015、0.002、0.000),其中转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞中SMO mRNA表达水平低于SM0 shRNA-1、SMO shRNA-2、sMO shRNA-3组(P=0.007、0.000、0.046).SMOshRNA-4干扰抑制效率为87%.Western blot可检测到SMO在MCF-7中的表达,干扰片段SMO shRNA-4的抑制效果较好.转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),转染SMO shRNA后cyclinD1 mRNA表达下降(P=0.000).结论已成功构建并筛选出SMO基因的RNAi表达质粒,SMO shRNA对乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用,Hedgehog信号通路可通过活化cyclinD1诱导细胞恶性增殖.
목적 구건병사선Smoothened(SMO)기인적RNAi표체질립,료해Hedgehog신호통로영향유선암세포증식적작용궤제.방법 이지질체LipofectaminemTM 2000개도전염유선암MCF-7세포.전염후48 h,채용실시정량RT-PCR기술검측전염세포중SMO기인mRNA적전록수평,사선유효적SMO RNAi질립,Western blot검측SMO단백재유선암MCF-7세포중적표체,CCK-8법비교전염전후유선암세포증식변화,실시정량RT-PCR검측SMO단발협상RNA(shRNA)대cyclinD1 mRNA표체적영향.결과 4개SMO shRNA표체재체SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3화SMO shRNA-4경측서감정증명삽입정학.전염48 h후,여MOCK조상비,SMO shRNA-1、SMOshRNA-3、SMO shRNA-4조SMO mRNA표체량균하강(P=0.015、0.002、0.000),기중전염SMO shRNA-4적MCF-7세포중SMO mRNA표체수평저우SM0 shRNA-1、SMO shRNA-2、sMO shRNA-3조(P=0.007、0.000、0.046).SMOshRNA-4간우억제효솔위87%.Western blot가검측도SMO재MCF-7중적표체,간우편단SMO shRNA-4적억제효과교호.전염SMO shRNA-4적MCF-7세포증식수도명현억제(P<0.01),전염SMO shRNA후cyclinD1 mRNA표체하강(P=0.000).결론 이성공구건병사선출SMO기인적RNAi표체질립,SMO shRNA대유선암세포증식유명현적억제작용,Hedgehog신호통로가통과활화cyclinD1유도세포악성증식.