华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2011年
2期
199-202
,共4页
李昂%徐红艳%石建峰%朱春晖%饶国洲%苟建重
李昂%徐紅豔%石建峰%硃春暉%饒國洲%茍建重
리앙%서홍염%석건봉%주춘휘%요국주%구건중
牙龈卟啉单胞菌%3-磷酸甘油醛脱氢酶%原核表达
牙齦卟啉單胞菌%3-燐痠甘油醛脫氫酶%原覈錶達
아간계람단포균%3-린산감유철탈경매%원핵표체
目的 克隆牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),并将其置于大肠杆菌中作融合表达.方法 利用PCR技术,克隆GAPDH,插入克隆载体pMD18-T中得到克隆重组子pMD18-T-GAPDH.克隆重组子与表达载体pET-32a双酶切后连接构建表达质粒pET-32a-GAPDH.重组原核表达质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,以不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.结果 核酸序列测定与分析表明:表达重组子pET-32a-GAPDH与NCBI核酸数据库中收录的GAPDH序列同源性达99.802%;在最佳浓度的IPTG诱导下,GAPDH可高效表达.结论 本实验成功克隆了牙龈卟啉单胞茵GAPDH基因,并在大肠杆菌中表达了GAPDH蛋白,为后续实验研究GAPDH的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础.
目的 剋隆牙齦卟啉單胞菌外膜蛋白3-燐痠甘油醛脫氫酶(GAPDH),併將其置于大腸桿菌中作融閤錶達.方法 利用PCR技術,剋隆GAPDH,插入剋隆載體pMD18-T中得到剋隆重組子pMD18-T-GAPDH.剋隆重組子與錶達載體pET-32a雙酶切後連接構建錶達質粒pET-32a-GAPDH.重組原覈錶達質粒經酶切鑒定後轉化大腸桿菌BL21感受態細胞,以不同濃度異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達融閤蛋白.結果 覈痠序列測定與分析錶明:錶達重組子pET-32a-GAPDH與NCBI覈痠數據庫中收錄的GAPDH序列同源性達99.802%;在最佳濃度的IPTG誘導下,GAPDH可高效錶達.結論 本實驗成功剋隆瞭牙齦卟啉單胞茵GAPDH基因,併在大腸桿菌中錶達瞭GAPDH蛋白,為後續實驗研究GAPDH的免疫學性能及相應的抗體製備奠定瞭基礎.
목적 극륭아간계람단포균외막단백3-린산감유철탈경매(GAPDH),병장기치우대장간균중작융합표체.방법 이용PCR기술,극륭GAPDH,삽입극륭재체pMD18-T중득도극륭중조자pMD18-T-GAPDH.극륭중조자여표체재체pET-32a쌍매절후련접구건표체질립pET-32a-GAPDH.중조원핵표체질립경매절감정후전화대장간균BL21감수태세포,이불동농도이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체융합단백.결과 핵산서렬측정여분석표명:표체중조자pET-32a-GAPDH여NCBI핵산수거고중수록적GAPDH서렬동원성체99.802%;재최가농도적IPTG유도하,GAPDH가고효표체.결론 본실험성공극륭료아간계람단포인GAPDH기인,병재대장간균중표체료GAPDH단백,위후속실험연구GAPDH적면역학성능급상응적항체제비전정료기출.
