西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
2011年
5期
861-867
,共7页
李慧%丛郁%常有宏%蔺经%盛宝龙
李慧%叢鬱%常有宏%藺經%盛寶龍
리혜%총욱%상유굉%린경%성보룡
豆梨%半胱氨酸蛋白酶抑制剂%基因%克隆%表达
豆梨%半胱氨痠蛋白酶抑製劑%基因%剋隆%錶達
두리%반광안산단백매억제제%기인%극륭%표체
采用RT-PCR结合RACE技术,从中国梨砧木--豆梨成熟种子中克隆获得豆梨半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因(PcCPI)的cDNA全长序列,并通过半定量RT-PCR分析不同胁迫处理对该基因表达水平的影响.结果表明:(1)PcCPIcDNA序列长度为980 bp,开放阅读框78～812 bp,编码的多肽由信号肽(29个氨基酸)和成熟肽(216个氨基酸)组成,具有3个植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因家族的高保守特征序列模式--LARFAVQE-HN、QXVXG和YQAKVWVKPW.(2)该蛋白与蔷薇科植物的CPI蛋白处于系统发育树的同一分支,且与苹果CPI蛋白的一致性最高(95.9%).(3)半定量RT-PCR结果显示:PcCPI基因在豆梨叶片中为诱导型表达,在人工模拟逆境条件下(包括喷施50 μmol/L MeJA或100 μmol/L ABA、刀片2次机械损伤、200 mmol/L NaCl胁迫、4℃低温或30℃高温胁迫)处理4 h后,豆梨叶片中PcCPI基因表达量明显上升,表明该基因参与了豆梨对生物或非生物胁迫的防御机制.
採用RT-PCR結閤RACE技術,從中國梨砧木--豆梨成熟種子中剋隆穫得豆梨半胱氨痠蛋白酶抑製劑基因(PcCPI)的cDNA全長序列,併通過半定量RT-PCR分析不同脅迫處理對該基因錶達水平的影響.結果錶明:(1)PcCPIcDNA序列長度為980 bp,開放閱讀框78～812 bp,編碼的多肽由信號肽(29箇氨基痠)和成熟肽(216箇氨基痠)組成,具有3箇植物半胱氨痠蛋白酶抑製劑基因傢族的高保守特徵序列模式--LARFAVQE-HN、QXVXG和YQAKVWVKPW.(2)該蛋白與薔薇科植物的CPI蛋白處于繫統髮育樹的同一分支,且與蘋果CPI蛋白的一緻性最高(95.9%).(3)半定量RT-PCR結果顯示:PcCPI基因在豆梨葉片中為誘導型錶達,在人工模擬逆境條件下(包括噴施50 μmol/L MeJA或100 μmol/L ABA、刀片2次機械損傷、200 mmol/L NaCl脅迫、4℃低溫或30℃高溫脅迫)處理4 h後,豆梨葉片中PcCPI基因錶達量明顯上升,錶明該基因參與瞭豆梨對生物或非生物脅迫的防禦機製.
채용RT-PCR결합RACE기술,종중국리침목--두리성숙충자중극륭획득두리반광안산단백매억제제기인(PcCPI)적cDNA전장서렬,병통과반정량RT-PCR분석불동협박처리대해기인표체수평적영향.결과표명:(1)PcCPIcDNA서렬장도위980 bp,개방열독광78～812 bp,편마적다태유신호태(29개안기산)화성숙태(216개안기산)조성,구유3개식물반광안산단백매억제제기인가족적고보수특정서렬모식--LARFAVQE-HN、QXVXG화YQAKVWVKPW.(2)해단백여장미과식물적CPI단백처우계통발육수적동일분지,차여평과CPI단백적일치성최고(95.9%).(3)반정량RT-PCR결과현시:PcCPI기인재두리협편중위유도형표체,재인공모의역경조건하(포괄분시50 μmol/L MeJA혹100 μmol/L ABA、도편2차궤계손상、200 mmol/L NaCl협박、4℃저온혹30℃고온협박)처리4 h후,두리협편중PcCPI기인표체량명현상승,표명해기인삼여료두리대생물혹비생물협박적방어궤제.
