华西口腔医学杂志
華西口腔醫學雜誌
화서구강의학잡지
WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY
2011年
4期
437-441
,共5页
李超%杨丹%石芳琼%李跃辉%陈新群%翦新春%蒋灿华
李超%楊丹%石芳瓊%李躍輝%陳新群%翦新春%蔣燦華
리초%양단%석방경%리약휘%진신군%전신춘%장찬화
MHC-Ⅰ类链相关基因A%Tca8113-Tb细胞系%质粒构建%基因转染
MHC-Ⅰ類鏈相關基因A%Tca8113-Tb細胞繫%質粒構建%基因轉染
MHC-Ⅰ류련상관기인A%Tca8113-Tb세포계%질립구건%기인전염
目的 构建人类MHC-Ⅰ类链相关基因A(MICA)的真核表达载体,转染人舌鳞癌脑高转移Tca8113-Tb细胞,建立稳定过表达MICA基因的口腔鳞癌细胞系.方法 采用PCR技术扩增pCMV-SPORT6-MICA中编码MICA基因的cDNA序列,重组至有绿色荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP-N1,构建最终的表达载体pEGFP-N1-MICA,脂质体法转染Tca8113-Tb细胞,G418筛选,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,有限稀释法建立稳定过表达MICA基因的Tca8113-Tb细胞系,RT-PCR、real time PCR和免疫细胞化学检测MICA在该细胞中的表达.结果 通过PCR技术获取TMICA基因并成功克隆入载体,测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同.转染的细胞可见绿色荧光蛋白表达,RT-PCR、real time PCR及免疫细胞化学检测到目的 基因MICA在转染细胞中为过表达.结论 pEGFP-N1-MICA真核表达载体的成功构建与稳定转染Tca8113-Tb细胞系的建立,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的实验基础.
目的 構建人類MHC-Ⅰ類鏈相關基因A(MICA)的真覈錶達載體,轉染人舌鱗癌腦高轉移Tca8113-Tb細胞,建立穩定過錶達MICA基因的口腔鱗癌細胞繫.方法 採用PCR技術擴增pCMV-SPORT6-MICA中編碼MICA基因的cDNA序列,重組至有綠色熒光蛋白標記的真覈錶達載體pEGFP-N1,構建最終的錶達載體pEGFP-N1-MICA,脂質體法轉染Tca8113-Tb細胞,G418篩選,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白的錶達,有限稀釋法建立穩定過錶達MICA基因的Tca8113-Tb細胞繫,RT-PCR、real time PCR和免疫細胞化學檢測MICA在該細胞中的錶達.結果 通過PCR技術穫取TMICA基因併成功剋隆入載體,測序鑒定該序列與GenBank中的序列相同.轉染的細胞可見綠色熒光蛋白錶達,RT-PCR、real time PCR及免疫細胞化學檢測到目的 基因MICA在轉染細胞中為過錶達.結論 pEGFP-N1-MICA真覈錶達載體的成功構建與穩定轉染Tca8113-Tb細胞繫的建立,為進一步研究該基因的功能奠定瞭良好的實驗基礎.
목적 구건인류MHC-Ⅰ류련상관기인A(MICA)적진핵표체재체,전염인설린암뇌고전이Tca8113-Tb세포,건립은정과표체MICA기인적구강린암세포계.방법 채용PCR기술확증pCMV-SPORT6-MICA중편마MICA기인적cDNA서렬,중조지유록색형광단백표기적진핵표체재체pEGFP-N1,구건최종적표체재체pEGFP-N1-MICA,지질체법전염Tca8113-Tb세포,G418사선,형광현미경하관찰록색형광단백적표체,유한희석법건립은정과표체MICA기인적Tca8113-Tb세포계,RT-PCR、real time PCR화면역세포화학검측MICA재해세포중적표체.결과 통과PCR기술획취TMICA기인병성공극륭입재체,측서감정해서렬여GenBank중적서렬상동.전염적세포가견록색형광단백표체,RT-PCR、real time PCR급면역세포화학검측도목적 기인MICA재전염세포중위과표체.결론 pEGFP-N1-MICA진핵표체재체적성공구건여은정전염Tca8113-Tb세포계적건립,위진일보연구해기인적공능전정료량호적실험기출.
